Cтраница 3
Погружая платиновый электрод в анаэробную культуру дрожжей или Escherichia coli, он об -, наружил, что на нем образуется потенциал, отрицательный по отношению к потенциалу такого же электрода, находящегося в аэробной стерильной среде. [31]
Основная ферментация - окисление сорбита - происходит в среде, содержащей 20 % сорбита и 0 4 % ( по сухой массе) дрожжевого автолизата. Кислотность среды регулируют уксусной кислотой, так же, как и в среде для посевного материала. В стерильную среду вносят 5 - 10 % ( по объему) посевного материала и ведут ферментацию при температуре 32 - 34 С и интенсивной аэрации-расход воздуха 2 - 3 л / мин на 1 л питательной среды. Процесс кончают при окислении 95 - 98 % сорбита. Раствор окисленного сорбита содержит 20 - 25 % сухих веществ. Сорбозу выделяют из раствора, обрабатывая его активированным углем, и затем многократно перекристаллизуя осадок. [32]
Поскольку на стерильную среду помещались нестерилизованные молодые гусеницы, прибавляли N-бутилпараокси-бензоат ( бутобен) для подавления роста плесени. В 1950 г. Бекк и Штауффер разводили личинок стеблевого мотылька стерильно на этой же среде без бутобена, в связи с тем что кладки яиц были разделены на отдельные яички трипсином, после чего химически стерилизовали каждое яйцо в отдельности. [33]
В целом же кюветы, лотки, вертикальные камеры или конвей-ерно-пластинчатые элементы в установках выращивания не обеспечивают активного перемешивания среды во время роста. Вследствие этого в СССР, а также за рубежом разрабатываются весьма перспективные динамические методы выращивания культур в непрерывно движущемся слое питательной среды. Принцип этих методов состоит в том, что стерильную среду ( отруби), смешанную с посевной культурой, на протяжении всего процесса выращивания и перемещения в непрерывном потоке подвергают вибрационным колебаниям. При этом среда становится более подвижной, уменьшается коэффициент внутреннего трения и сопротивления перемещению; импульсы, быстро следующие один за другим, передаются по всему транспортируемому слою, поддерживают среду во взвешенном состоянии, она как бы кипит и течет, как жидкость. [34]
Указанные недостатки устраняются при непрерывном культивировании, методы которого разработали С. В. Лебедев, А. А. Андреев, Н. Д. Иерусалимский и другие ученые. Из непрерывных процессов лучше всего разработан метод глубинной ферментации. В этом случае в ферментатор с культурой продуцента непрерывным потоком подается стерильная среда, а из него непрерывно вытекает готовая культуральная жидкость. Процесс может быть гомо - и гетерогенно непрерывным. При гомогенно непрерывном процессе в аппарате, где идет интенсивное перемешивание, все параметры ( концентрация питательных веществ, клеточный титр и др.) постоянны во времени. При гетерогенно непрерывном процессе несколько ферментаторов соединены вместе и образуют каскад. Питательная среда поступает в первый ферментатор и готовая культуральная жидкость вытекает из последнего ферментатора. Культивирование микроорганизмов в протоке через систему трубок также идет по принципу гетерогенно непрерывного процесса ферментации. [35]
Для изолирования культур используют также метод Линдне-ра. Согласно этому методу на покровное стекло кончиком пера наносят ряды капель культуры различного разведения и рассматривают в микроскоп каждую каплю. Каплю, где находится только одна клетка, с помощью кусочка стерильной фильтровальной бумаги переносят в стерильную среду. [36]
Кроме обычных опытов имеется много вариантов. Важнейшие: 1) опыты в стерильных условиях ( стерильные культуры) - корни растений находятся в стерильной среде; 2) опыты с изолированным питанием ( изолированные культуры) - одна часть корней растения находится в одном сосуде, а другая в другом; 3) опыты с текучими растворами ( текучие культуры) - питательные вещества в виде растворов все время поступают в сосуд, в отором растут растения, и вытекают из него. [37]
Для получения твердой среды добавляют 1 5 % агар-агара. Бактериальную взвесь ( активный ил, биопленку) из ряда последовательных десятикратных разведений вносят в стерильные пробирки и заливают стерильной средой до пробки. О развитии бактерий судят по образованию в столбике агара пузырьков газа азота. [38]
Уничтожение микроорганизмов-один из необходимых элементов микробиологической работы и основа консервирования пищевых продук-тов; поэтому стоит остановиться на нем подробнее. Освобождение какого-либо материала от живых микроорганизмов или их покоящихся форм называют обеспложиванием или стерилизацией. От стерилизации следует отличать частичное обеспложивание ( пастеризацию), а также консервирование. Если стерильная среда или микробная культура загрязняется случайно попавшими в нее микроорганизмами, то говорят о контаминации, или загрязнении. Такие понятия, как дезинфекция ( уничтожение всех патогенных микроорганизмов), асептика и антисептика, а также инфекция, употребляются главным образом в гигиене, а не в микробиологии. [39]
Используя метод поверхностных культур, микроорганизмы выращивают на твердых средах ( влажные отруби и др.) или на жидких средах, залитых тонким слоем ( 2 - 20 см) в специальные кюветы. В этом случае биомасса располагается на поверхности среды. Чаще всего этим методом выращивают грибы, например культуры рода Aspergillus, используемые для получения лимонной кислоты и ферментов. Сначала размножают споры, которыми инфицируют стерильную среду. В камерах с кюветами поддерживают нужную температуру и обеспечивают аэрацию - циркуляцию воздуха между кюветами. [40]
В природе встречается множество микроорганизмов. Чистую культуру обычно получают из одной изолированной клетки, которую потом постепенно размножают в стерильной среде. Эту работу проводят в стерильном боксе. Клетки из одной колонии при помощи петли или иглы в стерильных условиях переносят в стерильную среду, где они продолжают размножаться. [41]
На дне чашек остается тонкий слой жира. В эти чашки вносят обычным способом активный ил ( биопленку), затем наливают мясо-пептонный агар, который должен быть чуть теплым, иначе произойдет растворение жира и будет неравномерное покрытие им чашек. Чашки помещают в термостат при температуре 18 - 25, 30 и 37 С. Счет колоний ведут через 10 суток. Прибавление к среде стерильного раствора краски нильской синей облегчает распознавание колоний бактерий - в присутствии свободных жирных кислот среда вокруг колоний синеет; стерильная среда, содержащая нейтральные жиры, остается розовой. Без добавления краски под колониями жир белеет и становится непрозрачным. [42]
Эти три проблемы были блестяще решены Красильщиком. Благодаря методике, разработанной Красильщиком, рабочие выполняли лишь очень простые операции. Во избежание частой стерилизации свежую стерильную среду вводили в контейнеры без предварительной их стерилизации, после сбора старой среды со спорами; грибные споры, оставшиеся в сосуде, автоматически давали начало следующей культуре. Вот некоторые данные, приведенные Красильщиком: между посевом и сбором протекало 14 - 15 дней при 25, на 1 м2 среды получалось 180 - 220 г спор, для борьбы с обыкновенным свекловичным долгоносиком Cleo-nus puncttventris Germ, на 1 га требовалось 8 кг спор. Известно, что смельская установка произвела за 4 месяца летом 1884 г. 54 кг спор. Отсюда легко подсчитать, что в экспериментальной установке ежедневно функционировало около 2 3 м2 поверхности свежей среды. [43]
Для некоторых видов Anthomyiidae известны их требования к корму. Кригер и Спруйт [413], применяя стерильную среду, установили, что личинки луковой журчалки Eumerus tuberculatus Rond. [44]
При этом из более старого материала развиваются лишь единичные скопления гиф. Красноокрашенные скопления хламидоспор через 5 - 7 дней изменяются, белеют и увеличиваются вдвое, и из них вырастают мелкие тонкие гифы. В связи с тем что в висячей капле обычно развиваются и другие грибы и особенно бактерии, затрудняющие выделение чистой культуры, целесообразно добавлять в питательную стерильную среду стрептомицин и для посева брать лишь такие висячие капли, в которых не образовалось колоний других грибов. МПА или агар Сабуро. Культура развивается медленно, постепенно в следах иглы появ-ляетсятбольшое количество чашевидных с загнутыми кверху краями кирпично-красных колоний гриба. [45]