Cтраница 3
SP 2250 и OV 17 - выдерживают температуры до 300 С и кратковременное воздействие еще более высоких температур. Диапазон температур для жидкой фазы SP 1000 или FFAP ограничен 200 С. Колонки, изготовленные другими способами, вряд ли обладают столь же высокой сопротивляемостью к воздействию высоких температур, и во всех случаях меньшие температуры способствуют продлению срока службы колонки. [31]
В действительности трудно измерять и манипулировать крошечными объемами требуемых жидких проб. Недавно были разработаны новые методы для решения этой проблемы, и, как мы сказали выше, использование иммобилизованных слоев неподвижных фаз дает возможность прямого ввода относительно большого количества разбавленной пробы без вредных краткосрочных ( на эффективность колонки) или долгосрочных ( на срок службы колонки) последствий. Значения ширины зоны обычно очень малы, и соответственно предел детектирования на обоих типах колонок часто сравним. [32]
Продукты конденсации двухосновных кислот с двухатомными спиртами часто состоят из смеси полимеров с широким диапазоном молекулярных весов, поскольку эти реакции трудно довести до конца. Следовательно, большинство продажных полимеров содержит небольшое количество мономеров и низших полимеров, обладающих достаточно высокой упругостью, паров, что приводит к медленному улетучиванию их с колонки. Поэтому колонки перед работой следует подвергнуть тренировке, пропуская поток азота или гелия при температуре выше рабочей до достижения постоянства нулевой линии. Даже после соответствующей тренировки колонки с полиэфиром при температуре значительно выше 200 газят вследствие термического разложения. Срок службы колонки, заполненной реоплексом 400 составляет несколько недельдажеприработеприболее низких температурах. [33]
К сожалению, здесь экспериментатора поджидает несколько неожиданных трудностей. Стиро-гелевые колонки пригодны для обычных органических растворителей. При использовании специфически растворителей ( ДМФА, ДМАА) срок службы колонок резко сокращается. Особенно быстро стирогелевые колонки изменяют свои свойства при повышенных температурах. Изменение свойств насадок происходит постепенно. Поэтому исследователь должен регулярно проверять правильность работы колонок, проводить калибровку, оценивать эффективность колонок. [34]
При изменении ионной формы смолы или в присутствии органических растворителей таких, как ацетонитрил, ТГФ, может изменяться и объем смолы. Если смола уменьшается в объеме, упаковка в колонке оседает и образуется мертвый объем наверху колонки. Это оседание сопровождается потерей эффективности. Если смола набухает и упаковка в колонке увеличивается, то возрастает сопротивление в колонке, что значительно уменьшает скорость потока и может даже привести к разрушению сорбента. Невысокая стабильность ионогснных материалов является одним из недостатков ионообменной хроматографии, причем анионообмснни-ки менее стабильны, чем катионообменники. Для увеличения срока службы колонок используют нредколонки, а также регенерацию колонок сильным растворителем. Катиониты, например, регенерируют, обрабатывая 1 М азотной кислотой и продолжительно промывая той подвижной фазой, которая будет использована. Ионообмснники характеризуются степенью набухания и емкостью. Степенью набухания называют объем упакованного в колонну обмснника ( в мл), приходящийся на 1 г его в сухом виде, и имеет размерность мл / г. Максимальное количество ионов, которое может связать ионообмснник, определяет сто обменная смкосгь, которая совпадает с концентрацией ионогснных групп. Емкость выражается числом ммоль эквивалентов обмениваемого иона на 1 г сухого обмснника ( ммоль экв / г) или на 1 мл упакованного в колонну набухшего ионо-обменника ( ммоль экв / мл) при значениях рН, соответствующих его полной ионизации. [35]
Что касается скорости, чувствительности и стоимости, любой из газохроматографических методов выгодно отличается от существующих автоматических анализаторов на смоле, но последние удобнее и проще в обращении. Нетрудно представить себе прибор с помещенным в нем рядом образцов пептидов или белков, которые обрабатываются по очереди определенными реагентами и затем по одному подаются на хроматографическую колонку; в ходе элюирования пики идентифицируются, интегрируются, а результаты печатаются в виде количества наномолей аминокислоты. Сароф ( личное сообщение) уже работает в этом направлении, используя газофазное получение производных. Реагенты для приготовления ТФА-метиловых эфиров проходят вместе с газом-носителем над образцом, который затем упаривают в токе горячего газа и подают на колонку. С помощью кранов между секциями аминокислоты направляются или на следующую секцию, или же непосредственно в детектор. Этот метод должен облегчить автоматизацию, ускорить разделение и значительно увеличить срок службы колонки. [36]
Возможности ГХ еще более расширяются благодаря применению малозагруженных колонок. В таких колонках сорбент содержит 3 % НФ от веса обычно применяемых диато-митовых носителей. Уменьшение количества НФ вызывает пропроциональное уменьшение удерживаемого объема. Снижение температуры опыта, как правило, способствует увеличению селективности разделения, благодаря чему можно, не изменяя разделительной способности колонки, уменьшить ее длину и тем самым еще более сократить длительность анализа. Кроме того, уменьшение температуры разделения ведет к уменьшению потерь НФ. Возрастает срок службы колонки, исключается искажение масс-спектров улавливаемых микрофракций. [37]
Продукты конденсации двухосновных кислот с двухатомными спиртами часто состоят из смеси полимеров с широким диапазоном молекулярных весов, поскольку эти реакции трудно довести до конца. Следовательно, большинство продажных полимеров содержит небольшое количество мономеров и низших полимеров, обладающих достаточно высокой упругостью, паров, что приводит к медленному улетучиванию их с колонки. Поэтому колонки перед работой следует подвергнуть тренировке, пропуская поток азота или гелия при температуре выше рабочей до достижения постоянства нулевой линии. Даже после соответствующей тренировки колонки с полиэфиром при температуре значительно выше 200 газят вследствие термического разложения. Срок службы колонки, заполненной реоплексом 400 составляет несколько недельдажеприработеприболее низких температурах. Первые несколько сантиметров набивки отработанной колонки часто обнаруживают значительное потемнение. Это указывает, что срок службы колонки можно увеличить, используя перед аналитической колонкой и дозатором фор-колонку, содержащую полиэфир, для очистки газа-носителя. [38]
Аналитическая колонка представляет собой трубку из нержавеющей стали, заполненную сорбентом и закрытую с обеих сторон фильтрами ( фритами) для предотвращения высыпания сорбента. При использовании микроколонок с dK0 5 - 2 мм, необходимы специальные приборы типа хроматографа Миллихром. Соединение колонки с детектором и дозатором осуществляется стандартным капилляром минимальной длины с наружным и внутренним диаметром 1 6 и 0 25 - 0 3 мм соответственно. Уменьшение диаметра капилляра приводит к возрастанию вероятности его закупорки. Используемые фильтры обычно имеют эквивалентный диаметр пор d3w ж 2 мкм, что не создает значительного сопротивления потоку и надежно защищает сорбент от высыпания. Необходимость-перехода от малого диаметра в капилляре к большему в трубке самой колонки, высокий перепад давлений на колонке ( особенно в процессе упаковки), а также недопустимость образования мертвых объемов определяют конструкционные особенности колонок. Кроме этих основных требований, необходимо учитывать еще потребительские качества, среди которых одно из важных - обеспечение возможности продления срока службы колонки соединением ее с предколонкой. В последние несколько лет обращают внимание на легкость сборки - разборки колонки и возможность проводить эти операции без специального инструмента за минимальное время. Для получения высокой эффективности колонки очень большое значение имеет качество обработки внутренней поверхности трубки колонки. Цена готовых колонок достаточно высока. [39]
Аналитическая колонка представляет собой трубку из нержавеющей стали, заполненную сорбентом и закрытую с обеих сторон фильтрами ( фритами) для предотвращения высыпания сорбента. При использовании микроколонок с dK0 5 - 2 мм, необходимы специальные приборы типа хроматографа Миллихром. Соединение колонки с детектором и дозатором осуществляется стандартным капилляром минимальной длины с наружным и внутренним диаметром 1 6 и 0 25 - 0 3 мм соответственно. Уменьшение диаметра капилляра приводит к возрастанию вероятности его закупорки. Используемые фильтры обычно имеют эквивалентный диаметр пор d3 2 мкм, что не создает значительного сопротивления потоку и надежно защищает сорбент от высыпания. Необходимость-перехода от малого диаметра в капилляре к большему в трубке самой колонки, высокий перепад давлений на колонке ( особенно в процессе упаковки), а также недопустимость образования мертвых объемов определяют конструкционные особенности колонок. Кроме этих основных требований, необходимо учитывать еще потребительские качества, среди которых одно из важных - обеспечение возможности продления срока службы колонки соединением ее с предколонкой. В последние несколько лет обращают внимание на легкость сборки - разборки колонки и возможность проводить эти операции без специального инструмента за минимальное время. Для получения высокой эффективности колонки очень большое значение имеет качество обработки внутренней поверхности трубки колонки. Цена готовых колонок достаточно высока. [40]