Изменение - состав - элюент
Cтраница 2
Граоиентное элюирование является наиболее ценным методом в жидкостной хроматографии. Этим термином называют процесс, предполагающий изменение состава элюента во времени. Элюирующая способность подвижной фазы при этом должна прогрессивно возрастать, так, чтобы из колонки за приемлемое время элюировались сильно удерживаемые разделяемые вещества. [16]
 |
Зависимость удерживаемых объемов от М [ г ] макромолекул ПС (, ПЭО ( 4, ПМА ( А, ПВП ( о и НПС ( в ДМФА. а - стирогель. б - силанизированное МПС. в - исходное МПС. [17] |
В работе [111 ] рассмотрен случай, когда изменение состава элюента не изменяет качества растворителя, а только снижает его адсорбционную активность по отношению к силикагелю. [18]
С начала семидесятых годов в связи с появлением сложных детектирующих систем расширяется использование ЭВМ в ТСХ. Во многих лабораториях в настоящее время изучают возможности изменения состава элюента в ходе процесса разделения, а также варьирование градиента температурного поля вдоль хроматографической пластинки и во времени. [19]
Измерение радиоактивности возможно, только если разделяемые соединения имеют достаточный уровень радиоактивности. В этом случае определение очень специфично и ему не мешает изменение состава элюента. Имеются специальные сцинтилляционные счетчики для жидкостной хроматографии при высоких давлениях с объемом ячейки примерно 200 мкл. В некоторых случаях, чтобы улучшить условия счета при использовании очень слабого излучения, поток элюента можно остановить в тот момент, когда в измерительной ячейке находится основное количество радиоактивного вещества. Само собой разумеется, элюент должен быть прозрачен для сцинтилляционного излучения. Загрязнения, давление в ячейке, изменение скорости потока, а также факторы, препятствующие нормальному измерению при обычном стационарном методе определения радиоактивности, искажают сигнал детектора. [20]
Коэн и др. [30] на практике показали, что уравнение ( 4.67 а) справедливо в том случае, если величина а имеет постоянное значение. Однако они также показали, что это уравнение утрачивает силу, если при использовании изократических условий величина а изменяется с изменением состава элюента. Тем не менее уравнение ( 4.67 а) может служить в качестве хорошего эмпирического правила оптимизации продолжительности градиента ( см. гл. [21]
При разделении на неполярных адсорбентах с полярными элюентами удерживание определяется как взаимодействием адсорбент - вещество, так и взаимодействием вещество - элюент, причем на практике обычно используют один адсорбент ( силикагель с привитыми алкильными цепями) и регулируют изменение Ке и а изменением состава элюента. [22]
Необходимо подчеркнуть, что величина у лКС включает в себя остаточный свободный объем жидкости в колонке - eF06 - Некоторые авторы определяют объем элюата как объем, пропущенный через колонку после вытеснения остаточной жидкости; во избежание недоразумений мы не будем пользоваться таким определением. Такие вычисления имеют большое значение в тех случаях, когда нужно выяснить, как влияет на процесс изменение состава элюента. [23]
 |
Блок-схема системы градиентного элюирования для полумикро - ВЭЖХ. [24] |
На ординату нанесены величины поглощения при 260 им ( 0 32 ед. При снятии экспериментальных кривых исходным растворителем служил метанол, а конечным растворителем - раствор, содержащий 0 18 % ацетона в метаноле. Из рисунка видно, что изменение состава элюента при подаче его со скоростью 200 мкл / мин начинается через 3 мин, форма экспериментальной кривой хорошо согласуется с теоретической. [25]
Характер и степень связывания молекул вещества сорбентом сильно зависят от взаимодействия вещества с элюентом. В этом взаимодействии участвуют те же силы дипольного и дисперсионного характера, а также водородные связи и электростатические силы. Совокупность всех взаимодействий обусловливает степень растворимости вещества в элюенте. Склонность к адсорбции и растворимость вещества выступают как конкурирующие характеристики, соотношением которых можно управлять путем изменения состава элюента. Изменение силы и характера адсорбции вещества при этом может происходить как за счет изменения физических параметров его молекул ( заряда, конформации), так и за счет изменения эффективности конкуренции молекул элюента за центры сорбции, а также в результате того, что под действием элюента могут изменяться и сорб-ционные свойства самого сорбента. Этот фактор может придавать адсорбционной хроматографии особенно высокую степень избирательности. [26]
Полярные же группы молекул дозируемого вещества при адсорбции на неполярном адсорбенте из полярного элюента уменьшают удерживание, так как их межмолекулярное взаимодействие с полярными группами молекул элюента, влияя на их ориентацию, ослабляет межмолекулярное взаимодействие молекул дозируемого вещества с адсорбентом и облегчает их возвращение в объем элюента. Таким образом, в этом случае удерживание в основном определяется, во-первых, неспецифическим межмолекулярным взаимодействием молекул дозируемого вещества с адсорбентом и, во-вторых, специфическим межмолекулярным взаимодействием этих молекул с элюентом, причем последнее уменьшает удерживание. Этот молекулярный механизм удерживания надо иметь ввиду, так как распространенный в литературе по жидкостной хроматографии термин обращеннофазная хроматография не передает существа дела. Действительно, из лекции 16 следует, что органические вещества, во-первых, удерживаются из водных растворов и на полярном адсорбенте ( гидроксилированной поверхности силикагеля) и, во-вторых, порядок выхода органических веществ может быть изменен при изменении состава элюента как на полярном, так и неполярном адсорбентах. [27]
Это достигается при повышении с2 - концентрации конкурирующих ионов буферного раствора элюента. Непрерывное изменение состава элюирующего раствора осуществляется при градиентной элюции с помощью различных, но весьма простых устройств. Один из вариантов подобных установок представляет собой сосуд определенного объема с мешалкой, из которого раствор поступает в колонку. Вместе с тем в этот же сосуд непрерывно поступает раствор иного, постоянного состава из другого резервуара. Меняя соотношение объемов этих двух сосудов, можно получать различные законы изменения состава элюента. [28]
Это достигается при повышении са - концентрации конкурирующих ионов буферного раствора элюента. Непрерывное изменение состава элюирующего раствора осуществляется при градиентной элюции с помощью различных, но весьма простых устройств. Один из вариантов подобных установок представляет собой сосуд определенного объема с мешалкой, из которого раствор поступает в колонку. Вместе с тем в этот же сосуд непрерывно поступает раствор иного, постоянного состава из другого резервуара. Меняя соотношение объемов этих двух сосудов, можно получать различные законы изменения состава элюента. [29]
Преимущества метода подвода элюента сверху наглядно проявляются при применении ТСХ-пластинок с подложками из алюминиевой фольги или других непрозрачных материалов и при проведении разделения элюентом с градиентом состава ( разд. Фронт растворителя распространяется от центра, в который подают элюент, к периферии. Чтобы добиться симметричности разделения в радиальном направлении, систему тщательно герметизируют, располагают ее строго горизонтально, исключают влияние теплопередачи и после предварительного разделения повторно приводят систему в состояние равновесия. Состав элюента подчас изменяется в процессе разделения. Это объясняется тем, что элюент обычно состоит из различных компонентов с различными давлениями насыщенных паров, причем для достижения величины парциального давления каждому из компонентов требуется определенное время. Изменение состава элюента не оказывает отрицательного влияния на результаты разделения, проводимого с учетом этой особенности ( разд. [30]
Страницы: 1 2