Сферон

Cтраница 2

Преимуществами метода Касаи и Ишии [10] являются его чувствительность и простота: для исследования необходимо лишь небольшое количество белка; по сравнению с методом Данна и Чейкена [7] в этом методе концентрация фермента очень мала относительно KL, использование фронтального анализа упрощает выведенные уравнения; объемы элюирования можно определить более точно, поскольку они практически не зависят от концентрации. При использовании этого метода для определения констант диссоциации химотрипсина на сфероне, к которому был привязан с помощью гидрофобного гексаметилендиамина N-бензилоксикар-бонилглицил - о-фенилаланин, Туркова и др. [15] встретились с трудностями, обусловленными, очевидно, неспецифической сорбцией. [16]

Анализ эфирных экстрактов гидролизэтов плазмы при использовании сферона SDA, порапака Р, хромосорба 104, порапака Q, хромосорба 102 и АД 1090, сферона БД. [17]

Поскольку значения KL и / Ci очень близки, то можно сделать вывод, что на образование комплекса химотрипсина с антилизином не оказывает влияния ковалентная привязка последнего к сферону. Константы диссоциации комплекса химотрипсина с антилизином, как с растворимым, так и со связанным с матрицей, хорошо согласуются. [18]

Структура гранул гетерогенного гидрофильного макропористого геля. [19]

Сфероны химически устойчивы и прочны. Выпускают сфероны в виде правильной формы сферических частиц различных размеров, причем для аффинной хроматографии наиболее пригодны частицы диаметром 100 - 200 мкм. [20]

В продажу сферой поступает в сухом виде. Основными преимуществами его являются высокая механическая прочность и химическая стойкость. Механическая прочность сферона близка к прочности ионообменных смол, и хроматографирование на нем можно вести при высоких скоростях потока. По своей внутренней структуре эти гели являются макросетчатым ксерогель-аэрогелевыми гибридами. [21]

Иная картина наблюдается при очистке эндоглюканаз в режиме сорбции фермента с последующей его элюцией путем увеличения ионной силы. Как уже отмечалось, для этого требуется нанесение фермента при рН 7 - 8 5, что наряду с длительностью процесса ( особенно при использовании мягких носителей типа сефадекс) приводит к значительным, до 90 %, потерям активности фермента. Выходом из этого положения является применение более жестких носителей на основе сферона, трисак-рила, методов ВЭЖХ. Как будет показано ниже, это позволяет значительно увеличить разрешающую способность методов при практически полном сохранении активности фермента за счет быстрого проведения процесса. [22]

Хроматограммы химотрипсина на колоннах с макропористым сфероном ( о и с тем же сфероном с привитым ингибитором трипсина ( б ( J. Turkova et al., 1973. [23]

Биоспецифическая хроматография применяется для очистки ферментов, так как она позволяет извлекать ферменты из сложных смесей в одну стадию с высокой степенью очистки и с большим выходом. В последнее время в качестве адсорбентов-носителей в биоспецифической хроматографии находят применение как макропористые неорганические адсорбенты ( силикагели, силохро-мы, пористые стекла), так и макропористые органические сшитые сополимеры, например макропористые сополимеры глицидилме-такрилата с этилендиметакрилатом типа сферой ( см. лекцию 6) со сферическими зернами разных размеров. Эти адсорбенты-носители обладают разной удельной поверхностью и крупными порами разных размеров. Из колонны, заполненной обычным макропористым сфероном без иммобилизованного ингибитора, химотрипсин выходит вместе с остальными белками, а из колонны, заполненной сфероном с привитым ингибитором, сопутствующие белки выходят приблизительно за то же время, а химотрипсин прочно удерживается. [24]

Времена корреляции протонов при адсорбции воды на силикагеле. [25]

Поэтому применение этого метода в адсорбционных исследованиях ограничивается главным образом ад-сорбатами, содержащими атомы водорода, фтора, натрия, алюминия и кремния. Кроме того, ширина линий спектра ЯМР определенным образом связана с химическими сдвигами при адсорбции. В отношении времен релаксации и ширины линий наиболее интересными, по-видимому, являются работы по ЯМР протонов, преимущественно воды. Если н-декан адсорбируется на сфероне или алмазе, ширина линии первого адсорбированного слоя очень велика, но при адсорбции третьего и последующих слоев эта полоса расщепляется [58] на ряд узких линий. Поскольку узкая линия ЯМР указывает на достаточно высокую подвижность, приводящую к усреднению локальных магнитных полей, авторы считают, что расщепление линии свидетельствует о высокой подвижности молекул, находящихся выше второго слоя. Время релаксации в продольном ( Т) и поперечном ( Т2) направлениях можно связать с временной корреляцией t [59], которая приблизительно равна времени, требуемому для поворота молекулы на один радиан или ее перемещению на расстояние, сравнимое с собственными размерами. Ризинг и др. [60] показали, что для воды, адсорбированной на древесном угле, t аппроксимируется выражением т: 0еЗ / пт, где т0 составляет 3 - 10 - 23 с и Q равно 12 ккал / моль. Полученные этими авторами спектры ЯМР указывают на присутствие более чем одной формы адсорбированной воды. [26]

Эти полимеры содержат гидроксильные группы, которые обеспечивают их гидрофильность и, следовательно, хорошую смачиваемость водными растворами и удобны для присоединения вставок путем, например, реакции с бромцианом и последующих реакций. Однако эти сильно набухающие в водных растворах полимеры неудобны в практической работе. Поэтому в последнее время в качестве адсорбентов-носителей в биоспецифической хроматографии находят применение макропористые неорганические адсорбенты ( си-ликагели [159] и пористые стекла [160]), а также макропористые органические сшитые сополимеры, например, макропористые сополимеры сферой ( см. разд. На рис. 11.32 представлен пример биоспецифической хроматографии на таком сфероне. [27]

Как известно, даже конденсированные пленки обладают некоторой диффузионной поверхностной подвижностью. Ридил и Тэдейон [44] показали, что процесс переноса пленок стеариновой кислоты с одной поверхности на другую, по-видимому, обусловлен поверхностной диффузией в отдельных точках контакта твердых тел. Количественных данных по истинным коэффициентам поверхностной диффузии получено очень мало. Согласно Россу и Гуду [45], коэффициент диффузии бутана в монослое на сфероне 6 составляет около 5 - 10 - 3 см2 / с. Допустим, что средний диаметр области контакта равен около 10 - 3 см. Молекула проходит это расстояние примерно за 10 - 4 с. Такой скорости прохождения точек контакта относительно друг друга соответствует скорость скольжения 10 см / с. Таким образом, при обычных скоростях порядка 0 01 см / с сжатая пленка успевает образоваться. [28]

Хроматограммы химотрипсина на колоннах с макропористым сфероном ( о и с тем же сфероном с привитым ингибитором трипсина ( б ( J. Turkova et al., 1973. [29]

Страницы: 1 2 3