Cтраница 3
Для успешного применения метода аффинной хроматографии необходимо иметь представления о свойствах как нерастворимых носителей, так и иммобилизованных аффинных лигандов. Одними из основных свойств, определяющих возможность использования нерастворимых носителей для целей аффинной хроматографии, являются сорбционные. Для связывания аффинного лиганда важно количество активируемых или активных групп, способных присоединить молекулы аффинного лиганда. Число групп, которые могут быть использованы для иммобилизации, часто оценивается на основе данных о присоединении низкомолекулярных веществ, например глицина или гли-циллейцина, к эпоксиактивированным гелям. Некоторые методы определения содержания этих веществ описаны в разд. Из табл. 8.1, в которой приведены количества глицина и химотрипси-на, присоединенных к различным типам сферона, видно, как важно принимать во внимание размер иммобилизуемых молекул и площадь поверхности нерастворимого носителя. [31]
После пропускания через колонку фракции, содержащие белок, объединяют и доводят до определенного объема 0 05 М раствором ацетата натрия. Вторую часть раствора альбумина, которая служит в качестве контрольной, доводят до того: же объема. Совпадение значений оптической плотности обоих растворов при 280 нм показывает, что неспецифическая сорбция на геле не имеет места. В случае сферона, если сравниваемые растворы не обнаруживают одинакового поглощения, гель следует промыть органическими растворителями, разбавленной кислотой, а затем тщательно дистиллированной водой. [32]