Cтраница 2
Некоторые авторы [35, 90] предпочитают простые изящные методы, основанные на измерении площади пятна, несмотря на несколько большую точность спектрофотометрических методов. Другие [70], наоборот, предпочитают метод элюирования измерению площади пятна для определения адреналина, хотя сведения о статистических данных не приводят. [16]
Следует иметь в виду, что метод позволяет получать удовлетворительные результаты только при условии очень тщательного выполнения всех операций, особенно измерения площади пятен. [17]
Для количественного определения севина в исследуемой пробе применяли несколько способов: визуальное сравнение окрашенных пятен с интенсивностью окраски пятен стандартных растворов, измерение площади пятна и нахождение количества препарата по заранее составленной калибровочной кривой ( координаты С в мкг и S в мм2), колориметрический способ. [18]
В адсорбционной ТСХ следует также учитывать размывание, обусловленное нелинейностью изотермы адсорбции, и возникающие при этом дополнительные погрешности, связанные с измерением площади пятна. Для вогнутой изотермы результаты оказываются обратными. [19]
Количественное определение ионов после хроматографиче-ского разделения на бумаге можно проводить несколькими методами: 1) извлечением из пятен отдельных компонентов после разделения смеси и количественное их определение обычными микроаналитическими методами; 2) измерением площади пятен на хроматограммах. Площадь S пятна на хроматограмме является функцией концентрации С компонента в анализируемой пробе: S a lg С В, где а и & - постоянные, определяемые экспериментально. Однако первый метод трудоемкий, а при использовании второго приведенная зависимость площади пятна от логарифма концентрации соблюдается не строго и для получения более или менее надежных результатов необходимо проводить много параллельных определений. Одной из причин разброса результатов анализа является то, что при хроматогра-фировании разделение происходит по нескольким механизмам, протекающим одновременно - распределение ионов между двумя растворителями, ионный обмен, образование малорастворимых осадков, физическая адсорбция на бумаге. [20]
Количественное определение ионов после хроматографиче-ского разделения на бумаге можно проводить несколькими методами: 1) извлечением из пятен отдельных компонентов после разделения смеси и количественное их определение обычными микроаналитическими методами; 2) измерением площади пятен на хроматограммах. Площадь S пятна на хроматограмме является функцией концентрации С компонента в анализируемой пробе: S a lg С В, где а и Ъ - постоянные, определяемые экспериментально. Однако первый метод трудоемкий, а при использовании второго приведенная зависимость площади пятна от логарифма концентрации соблюдается не строго и для получения более или менее надежных результатов необходимо проводить много параллельных определений. Одной из причин разброса результатов анализа является то, что при хроматогра-фировании разделение происходит по нескольким механизмам протекающим одновременно - распределение ионов между двумя растворителями, ионный обмен, образование малорастворимых осадков, физическая адсорбция на бумаге. [21]
Методы, используемые для количественного определения веществ в зонах, могут быть различными и зависят от природы анализируемых веществ: элюирование ( с последующим весовым, спект-рофотометрическим, флуориметрическим, полярографическим, радиометрическим измерением), измерение площади пятна, денсито-метрирование. Считается, что наиболее точным является метод элюи-рования ( ошибки 1 %), но для его осуществления необходимо сравнительно большое количество материала. Точность денситометри-ческих методов несколько ниже ( 1 - 2 %), но для анализа требуется гораздо меньше материала. [22]
Практически площадь пятна увеличивается с ростом количества вещества быстрее, чем требует теория. Измерение площади пятен по сравнению с денситометрией имеет, пожалуй, то преимущество, что при окрашивании хроматограммы можно обойтись воспроизводимостью окраски только на границе пятна, где избыток реактива наибольший. [23]
Количественное определение производят путем визуального сравнения исследуемой пробы со стандартами, а также путем сравнения площади пятна пробы и стандарта на одной пластинке, учитывая, что при концентрациях до 20 мкг указанных соединений существует пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации препарата. Измерения площади пятен производят наложением промасленной миллиметровой бумаги на хроматографическую пластинку и прямым подсчетом квадратных миллиметров. [24]
Практически площадь пятна увеличивается с ростом количества вещества быстрее, чем требует теория. Измерение площади пятен по сравнению с денситометрией имеет, пожалуй, то преимущество, что при окрашивании хроматограммы можно обойтись воспроизводимостью окраски только на границе пятна, где избыток реактива наибольший. [25]
При нахождении количества вещества непосредственно на пластине используют несколько методов. Наиболее простой состоит в измерении площади пятна. [26]
Зоны идентифицируют по величине Rf и сравнением с пятнами свидетелей. Ориентировочно оценивают содержание каждого компонента путем измерения площади пятен индивидуальных веществ и зон смеси. Для более точного количественного определения компонентов пластинку опрыскивают свежеприготовленным раствором NaNO2 концентрации 0 1 мае. Обнаруженные пятна соскабливают в колбы, добавляют 5 мл раствора НС1 концентрации 0 1 моль / л, встряхивают 5 мин, смесь центрифугируют, аликвотную часть прозрачного раствора ( 3 мл) помещают в пробирку, вносят 1 мл раствора NaNO2 и 1 мл Ы - ( 1-нафтил) - этилендиамина. [27]
Такие определения проводят прямыми и непрямыми методами. Прямое определение осуществляют непосредственно на хроматограмме путем измерения площади пятен или определения интенсивности их окраски. Точность таких определений невелика. Непрямое определение ( более точное) основано на экстракции зон и анализе экстрактов химическими и физико-химическими методами. [28]
Существуют различные способы определения количества вещества на хроматограмме. Наиболее простой ( полуколичественный) способ - это измерение площади пятна при помощи планиметра или перенесение хроматограммы на миллиметровую бумагу. Вычисленную площадь пятна сравнивают с площадью пятен стандартов, нанесенных на ту же пластинку. Площадь пятна зависит от количества нанесенного вещества, толщины слоя и объема наносимого раствора. [29]
Некоторые авторы [35, 90] предпочитают простые изящные методы, основанные на измерении площади пятна, несмотря на несколько большую точность спектрофотометрических методов. Другие [70], наоборот, предпочитают метод элюирования измерению площади пятна для определения адреналина, хотя сведения о статистических данных не приводят. [30]