Трансген
Cтраница 3
Клетки, выделенные из мышиных эмбрионов на стадии бластоцисты, могут пролиферировать в культуре, сохраняя способность к дифференци-ровке в любые типы клеток, в том числе и в клетки зародышевой линии, при введении в другой эмбрион на стадии бластоцисты. ES-клет-ки в культуре легко модифицировать методами генной инженерии без нарушения их шпорипо-тентности. Например, в определенный сайт несущественного гена в их геноме можно встроить функциональный трансген. Это позволяет избежать случайного встраивания, характерного для метода микроинъекций и ретровирусных векторных систем. [31]
И вновь авторы идут на подлог. Почему 80 % огородников хотят перейти на ГМ-картошку. Оказывается: Населению Украины было предоставлено мало информации о том, какие именно пестициды прилагаются в наборе к трансгенам ( с. Все перевернуто вверх ногами: новая технология как раз и призвана резко сократить применение пестицидов. [32]
Таким образом, из 1000 имплантированных оплодотворенных яйцеклеток развивается от 30 до 50 трансгенных мышат. Кроме того, введенная ДНК может интегрировать в любое место в геноме, и зачастую множество ее копий включаются в один сайт. В организме некоторых особей трансген может не экспрессироваться из-за неподходящего окружения сайта интеграции, а в организме других число копий чужеродного гена может оказаться слишком большим, что может привести к гиперпродукции белка и нарушению нормальных физиологических процессов. И все же, несмотря на все это, метод микроинъекций используют для получения линий мышей, несущих функциональные трансгены, довольно часто. [33]
При гомологии трансгена с каким-либо участком генома мыши используют блот-гибризацию, если же гомология незначительна или она отсутствует совсем, то ограничиваются дот-блот - или слот-блот-анализом ( от анг. В первом случае, когда трансген идентичен эндогенному гену, он все равно окружен другими нуклеотидными последовательностями. Поэтому, используя ре-стриктазы, удается доказать локализацию трансгена в иных ре-стрикционных фрагментах. Во втором случае, когда трансген негомологичен геному мыши, то он ограничен другими сайтами рестрикции, и здесь удобен дот-блот - или слот-блот-анализ в качестве экпсресс-метода. Фрагменты анализируемой геномной ДНК на нитроцеллюлозных фильтрах выявляют при экспозиции с рентгеновской пленкой. [34]
В тестовых экспериментах из пула в 2470 ооцитов были получены два трансгенных теленка. Этот результат указывает на результативность описанного подхода, но также и на его низкую эффективность. Исследования в этой области продолжаются, и есть надежда на усовершенствование методики трансгеноза. Например, скоро появится возможность отбирать небольшое число клеток у развивающегося эмбриона in vitro и тестировать их на наличие трансгена; такая потеря клеток эмбрионом не помешает его нормальному развитию. Этот тест позволит имплантировать только эмбрионы, несущие трансген. [36]
В тестовых экспериментах из пула в 2470 ооцитов были получены два трансгенных теленка. Этот результат указывает на результативность описанного подхода, но также и на его низкую эффективность. Исследования в этой области продолжаются, и есть надежда на усовершенствование методики трансгеноза. Например, скоро появится возможность отбирать небольшое число клеток у развивающегося эмбриона in vitro и тестировать их на наличие трансгена; такая потеря клеток эмбрионом не помешает его нормальному развитию. Этот тест позволит имплантировать только эмбрионы, несущие трансген. [37]
Прогресс в области технологий ДНК, проект по изучению генома человека и более глубокое понимание роли мутаций в возникновении рака способствуют разработке новых ге-нотоксических анализов, которые, вероятно, будут включены в стандартные процедуры скрининга. Среди них следует упомянуть использование трансгенных клеток и грызунов. Трансгенные системы - это системы, в которых гены одного вида вводятся в клетку организма. Например, трансгенные мыши используются в опытах по определению мутации в любом органе или ткани животного на основе введения бактериального гена в организм мыши. Сегодня можно проводить анализ фактических мутаций, индуцируемых в трансгенах трансгенетических грызунов либо в натив-ных генах, таких как prt, либо в генах-мишенях внутри Salmonella, что позволяет выяснить природу мутаций, вызываемых химическими веществами. [38]
Таким образом, из 1000 имплантированных оплодотворенных яйцеклеток развивается от 30 до 50 трансгенных мышат. Кроме того, введенная ДНК может интегрировать в любое место в геноме, и зачастую множество ее копий включаются в один сайт. В организме некоторых особей трансген может не экспрессироваться из-за неподходящего окружения сайта интеграции, а в организме других число копий чужеродного гена может оказаться слишком большим, что может привести к гиперпродукции белка и нарушению нормальных физиологических процессов. И все же, несмотря на все это, метод микроинъекций используют для получения линий мышей, несущих функциональные трансгены, довольно часто. [39]
 |
Трансгенные конструкции, содержащие гены человека под контролем промоторов, специфичных для молочных желез, и реципиентные организмы. [40] |
К сожалению, этот положительный результат частично обесценивался различными патологиями: у животных отмечались язва желудка, почечная недостаточность, хромота, воспаление перикарда, уменьшение подвижности суставов, предрасположенность к пневмонии. Причины этих симптомов неизвестны. Возможно, они связаны с долговременным присутствием в организме избытка гормона роста. В этих экспериментах трансген синтезировался более или менее непрерывно. Были созданы также трансгенные овцы с повышенной скоростью роста шерсти. [41]
Страницы: 1 2 3