Cтраница 3
Эмбриональные ткани или молодые проростки в количестве 80 - 100 г обрабатывают антисептиком, измельчают и растирают в жидком азоте ( см. стр. Растертый материал заливают 3 4 объемами смеси 0 15 М NaCl - 0 01 М ЭДТА - 0 05 М трис-буфера, рН 8 2 и гомогенизируют с помощью блендора 10 минут. Смешивание продолжается при комнатной температуре 1 5 - 2 часа. [31]
Известно, что такие эфиры довольно легко пидролизуются, а также подвергаются аминоли-зу. Можно ожидать, что при наличии тройного промежуточного комплекса возможно образование и кислоты, и амида, причем относительное содержание последнего должно возрастать при увеличении концентрации трис-буфера, но не зависеть от скорости расходования пенициллина. Результаты анализа продуктов полностью согласуются с предположением о промежуточном образовании тройного комплекса. [32]
Очистка фермента на этой стадии достигается за счет денатурации белков, которые отделяют центрифугированием. Изменение рН белкового раствора следует осуществлять осторожно, по возможности не использовать сильные кислоты и щелочи. Рекомендуется добавлять уксусную кислоту, трис-буфер, карбонат натрия и др. Добавление соответствующего буфера или кислоты проводят на холоде. [33]
Изучая электродную функцию AgjS-мембранного электрода, Сторп и Гюильбо [622] установили, что этот электрод более селективен по отношению к катионам тиохолина ( ТС), чем ацетилтиохолина ( АТС) при низких концентрациях. При высоких концентрациях АТС или ТС этот эффект не наблюдается. Фосфатный буфер более пригоден, чем трис-буфер. [34]
Навеску ткани гомогенизируют ( приготовление препарата см. на с. Пот-тера в 5-кратном объеме среды выделения следующего состава: 0 01 М трис-буфер ( рН 7 6), 0 02 М MgCl2 и 0 05 М сахароза. Гомогенат центрифугируют на холоде при 18000 g в течение 30 мин. Центрифугат сливают в колбу, осадок суспендируют в таком же объеме среды выделения и повторяют гомогенизацию. Гомогенат центрифугируют, осадок отбрасывают, а центрифугах объединяют с первым. Объединенный раствор подвергают ультрацентрифугированию при 105000 g в течение 90 мин. [35]
Для концентрации энтеровирусов применяется бентонитовый метод. Смесь встряхивают 3 - 5 мин, центрифугируют при 2000 - 3000 об / мин в течение 10 - 15 мин. Осадок ( вирус-бентонит) отмывают 20 - 40 мл дистиллированной воды. Элюцию вируса осуществляют 0 05 М раствором трис-буфера ( рН 9 0) при интенсивном встряхивании в течение 4 - 5 мин. [36]
Ей отвечало динамическое равновесие, при котором незначительная часть молекул Трис находилась в растворе в виде ионов Трис, а подавляющее большинство их было незаряжено. При его добавлении происходит как бы титрование Трис-буфера кислотой. Первоначальное равновесие нарушается: теперь большее число молекул Трис приобретает положительный заряд, однако несколько увеличивается и равновесная концентрация протонов в растворе - он понемногу ( буферный эффект. Этому моменту отвечает превращение почти всех молекул Трис в положительные ионы, так как буферная емкость Трис-буфера при таком рН уже практически исчерпывается. [37]
Необходимо отметить, что данные, полученные нами с отрезками мезокотилей кукурузы, не совпадают с результатами Кея ( Key, 1963), который работал с этим же объектом. В опытах Кея показано, что 2 4 - Д в концентрации, усиливающей рост, снижает за 12 час. Основное отличие наших опытов от опытов Кея заключается в том, что мы проводили фиксацию отрезков охлажденным этанолом, тогда как в опытах Кея отрезки после инкубации не фиксировались, а растирались в стеклянном гомогенизаторе в 0 01 М трис-буфере ( рН 7 5) с 0 5 М сахарозы. [38]
Берут 1 5 мг препарата щелочной фосфатазы и центрифугируют при 4500 g в течение 20 мин при 4 С. Осторожно удаляют супернатант и к осадку добавляют 0 5 мг очищенных иммуноглобулинов в концентрации 2 5 мг / мл в фосфатном буфере. Раствор диализуют против фосфатного буфера 0 15 М ( рН 7 2) в течение ночи, доводят объем до 0 5 мл и добавляют раствор глютаральдегида до конечной концентрации 0 2 %, инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч при осторожном перемешивании. Доводят объем до 2 мл 0 15 М фосфатным буфером и диализуют против того же буфера в течение ночи при 4 С. Затем раствор доводят до 10 мл трис-буфером и хранят при 4 С. [39]
Градиенты, приготовленные из химически чистой сахарозы на свежих буферных растворах, обычно не содержат заметной нуклеазной активности. Однако готовые градиенты иногда все же следует проверять на нуклеазную активность. Если необходимо максимально защитить РНК от нуклеазного действия, то перед приготовлением градиента растворы сахарозы следует перемешивать с бентонитом в течение 1 час или более продолжительного времени. В этом случае для приготовления градиента рекомендуется использовать ацетатный буфер. Буферы, в которых могут расти микроорганизмы, особенно ацетатный и трис-буфер, следует приготавливать непосредственно перед употреблением. [40]