Фингерпринт
Cтраница 1
Фингерпринты, полученные после гидролиза гемоглобиновой мРНК различными нуклеазами, должны отличаться от фингерпринтов, полученных из известного образца рРНК из ретикулоцитов. [1]
При получении фингерпринтов с использованием тонкослойной гомохроматографии разделение в первом направлении на ацетилцеллюлозе проводят таким же способом, как описано выше. Длинные олигонуклеотиды обычно локализуются в интервале между голубым и красным маркерами, и именно с этой части полоски осуществляют перенос на пластинку с тонким слоем DEAE-целлюлозы. Применяют пластинки размером 20 х40 см. Еще влажную полоску аце-тилцеллюлозы осторожно помещают на пластинку с тонким слоем на расстоянии - 2 см от одного конца перпендикулярно направлению гомохроматографии. [2]
В упоминавшемся выше диапазоне фингерпринта расположены полосы, отвечающие различным деформационным колебаниям. В этом диапазоне имеются не только полосы поглощения, характерные для изучаемого соединения в целом, но и полосы, типичные для некоторых группировок. Так, картина распределения полос поглощения в диапазоне 1000 - - 750 см помогает выяснить положение заместителей у двойной связи или в ароматическом кольце. [3]
 |
Камера для тонкослойного электрофореза. [4] |
Большой интерес представляет тонкослойная модификация [40] бумажного фингерпринта по Инграму, позволяющая в десять и более раз сократить время получения пептидных карт ( фингер-принтов) и существенно уменьшить количество анализируемого триптического гидролизата. [5]
Поэтому этот метод разделения необходимо сочетать с такими приемами фракционирования, как фингерпринт и ионообменная хроматография. [6]
Фингерпринты, полученные после гидролиза гемоглобиновой мРНК различными нуклеазами, должны отличаться от фингерпринтов, полученных из известного образца рРНК из ретикулоцитов. [7]
На колонке со смолой Дауэкс 50X2 удавалось разделить на отдельные пики все пептиды, определяемые фингерпринтом, по Инграму. Эта колонка оказалась весьма селективной, разделяя изомерные пептиды: вал-тре-лей и тре-вал-лей, ала-гли и гли-ала, гли-глу и глу-гли. [8]
Более быстрым методом разделения пептидов энзиматиче-ского гидролизата является метод пептидных карт ( отпечатка пальцев, или фингерпринта), сочетающий высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге. С помощью этого метода возможно сопоставление пептидных смесей, получаемых при расщеплении различных белков, и выявление столь малых различий в аминокислотном составе отдельных пептидов, как замещение единичной аминокислоты какой-либо другой. Такие различия имеют большое значение при сравнительном изучении гомологичных белков различных видов растений и животных, а также при определении генетических изменений в структуре белка, возникающих в результате точечной мутации. [9]
Отдельные пятна элюируют, и в тех случаях, когда не требуется дополнительной очистки, олигонуклеотиды идентифицируют и определяют молярную концентрацию по их радиоактивности относительно суммарной радиоактивности. Типичные фингерпринты, полученные для РНК вируса-сателлита вируса некроза табака путем гидролиза панкреатической иТ - ] - РНК-азами, показаны на рис. 11.1 и 11.2. Совпадение картин, полученных в разных лабораториях, подтверждает, что для идентификации мономеров, димеров и тримеров достаточно знать их положение на фингерпринте. [10]
Были проведены широкие систематические исследования состава флавоноидов в высших растениях различных видов и сортов. Для получения фингерпринтов, позволяющих быстро определять состав флавоноидов у того или иного вида растения, использовали двумерную хроматографию на бумаге. Было показано, что состав флавоноидов является чрезвычайно важным таксономическим признаком как при установлении родства между видами, принадлежащими к одному семейству, так и при выявлении различий между близкородственными видами. В этом отношении может быть очень характерным присутствие флавоноидов тех или иных классов и распределение заместителей у индивидуальных соединений. [11]
Наряду с методами фингерпринта для быстрой идентификации и выяснения структуры олигонуклеотидов такой подход представляется наиболее перспективным для будущих исследований в этой области. [12]
Такую смесь меченых фрагментов олигонуклеотида снова подвергают двумерному фракционированию электрофорезом на ацетил-целлюлозе и гомохроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе, как описано выше, а затем проводят авторадиографию. Однако теперь вместо разбросанных по всей пластинке пятен фингерпринта получается зигзагообразная цепочка следующих друг за другом пятен ( рис. 173), анализ расположения которых дает информацию о последовательности нуклеотидов в олигонуклеотиде. [13]
Пики меньшей интенсивности целесообразно рассматривать позже, при установлении часют колебаний связей С - Н, СС и фенильной группы. Область ниже 1400 см 1, особенно богатая пиками и перегибами, которую часто называют областью отпечатка пальцев или фингерпринта, как правило, с большим трудом поддается расшифровке по табличным данным, так как в этой области спектра соединения, для которых наблюдаются сходные полосы поглощения в области 3600 - 1400 см 1, имеют почти всегда различные частоты колебаний. Поэтому на первом этапе расшифровки спектров эту область не рассматривают. [14]
Это было подтверждено гидролизом олигонуклеотида под действием фосфодиэстеразы селезенки с образованием трех Ср и одного А. Если не считать этого примера, использование спектров ДОВ и КД Для структурного анализа тетрамеров или более коротких олигонуклеотидов было практически полностью вытеснено методами фингерпринтов, описанными в гл. Можно напомнить, что для надежного определения последовательности достаточно подвергнуть неизвестный олигонуклеотид частичному гидролизу при помощи фосфодиэстеразы селезенки с последующим электрофорезом на DEAE-целлюлозе. Несмотря на то что в ходе определения исходное вещество разрушается, для анализа требуется очень небольшое количество радиоактивного олигонуклеотида. [15]
Страницы: 1 2