Cтраница 2
Отдельные пятна элюируют, и в тех случаях, когда не требуется дополнительной очистки, олигонуклеотиды идентифицируют и определяют молярную концентрацию по их радиоактивности относительно суммарной радиоактивности. Типичные фингерпринты, полученные для РНК вируса-сателлита вируса некроза табака путем гидролиза панкреатической иТ - ] - РНК-азами, показаны на рис. 11.1 и 11.2. Совпадение картин, полученных в разных лабораториях, подтверждает, что для идентификации мономеров, димеров и тримеров достаточно знать их положение на фингерпринте. [16]
Лабри ( Labrie, 1969) нашел, что 105 РНК, выделенная из полиакриламидного геля, имеет в 5 раз большую удельную радиоактивность, чем 55, 185 и 295 ри-босомные РНК. Молекулярный вес 10S РНК равен примерно 1 9 - Ю5, что несколько выше минимального для / 3 - гемоглобиновой мРНК и что соответствует приблизительно 550 нуклеогидам. Анализ фингерпринтов исключает возможность того, что 10 РНК является продуктом деградации 185 или 295 РНК. [17]
Не все нуклеиновые кислоты можно получить биосинтети - чески со специфической радиоактивностью, достаточно высокой для применения метода фингерпринтирования. Получающиеся этим способом меченые олигонуклеотиды можно затем подвергать двумерному фракционированию подобно тому, как это описано выше. Обычно нерадиоактивные олигонуклеотиды получают комбинированным воздействием специфической эндонуклеазы и фосфомоноэстеразы. В результате фингерпринты с олигонуклеотидами, меченными по 5 -концу ( с дефосфорилированным Зг-концом), практически не отличаются от полученных в результате эндонуклеазного гидролиза равномерно меченной нуклеиновой кислоты. [18]
После того как установлена первичная структура - какого-либо белка, обычно нет необходимости проводить полное изучение аминокислотной последовательности у гомологичных белков из близких ( соответствующих) источников. Для этого подвергают гидролизу трипсином белок с известной структурой и параллельно ему гомологичный белок; полученные в результате гидролиза пептиды разделяют обычно с помощью двумерного электрофореза или хроматографии. Если разница в последовательностях невелика, то большинство пептидов должны занимать идентичное положение на двумерном фингерпринте. Эта техника особенно полезна при изучении аномальных гемоглобинов, которые отличаются от нормального природой только одного участка. [19]
Поскольку в молекуле гораздо больше деформационных, чем валентных колебаний, то эта область спектра особенно богата пиками и перегибами. Поэтому ее часто называют областью отпечатка пальцев, или фин-герпринта. Иногда близкие по строению соединения имеют сходные линии поглощения в области 2 5 - 7 мк ( 4000 - 1430 см 1), но их спектры почти всегда различны в области фингерпринта. [20]
Поскольку в молекуле гораздо больше деформационных, чем валентных колебаний, то эта область спектра особенно богата пиками и перегибами. Поэтому ее часто называют областью отпечатка пальцев, или фин-герпринта. Иногда близкие по строению соединения имеют сходные линии поглощения в области 2 5 - 7 мк ( 4000 - 1430 сиг 1), но их спектры почти всегда различны в области фингерпринта. [21]