Флуоресценция - образец
Cтраница 3
Часто поглощение промежуточных продуктов наблюдается в той области, где флуоресцирует исходное соединение. Чтобы получить истинную кинетическую кривую, необходимо записать кривую флуоресценции образца при закрытом спектральном источнике. [32]
Часто поглощение промежуточных продуктов наблюдается в той области, где флуоресцирует исходное соединение. Чтобы получить истинную кинетическую кривую, необходимо записать кривую флуоресценции образца при закрытом спектральном источнике. Поскольку форма флуоресцентного излучения повторяет форму вспышки, ее имеет смысл учитывать только при малых временах. Перестройка осциллографической кривой гибели промежуточного продукта проводится следующим образом. [33]
ФЭУ, например при изменении ширины щели, может исказить сигнал, так как форма сигнала ФЭУ зависит от освещаемой площади катода; 5) рассеянный образцом свет может накладываться на люминесценцию; 6) электрические и магнитные помехи от импульсной лампы могут искажать сигнал; 7) плохая регулировка ФЭУ. Неучет какого-либо из этих факторов может свести на нет точную математическую обработку экспериментальных данных. Что касается причин 1 и 2, то опыт показывает, что меньшая ошибка получается при записи формы вспышки лампы на длине волны флуоресценции образца, В каждом конкретном случае, чтобы точно учитывать форму вспышки возбуждающего света, нужно проводить проверку правильности выбранных условий. [34]
ФЭУ, например при изменении ширины щели, может исказить сигнал, так как форма сигнала ФЭУ зависит от освещаемой площади катода; 5) рассеянный образцом свет может накладываться на люминесценцию; 6) электрические и магнитные помехи от импульсной лампы могут искажать сигнал; 7) плохая регулировка ФЭУ. Неучет какого-либо из этих факторов может свести на нет точную математическую обработку экспериментальных данных. Что касается причин 1 и 2, то опыт показывает, что меньшая ошибка получается при записи формы вспышки лампы на длине волны флуоресценции образца. В каждом конкретном случае, чтобы точно учитывать форму вспышки возбуждающего света, нужно проводить проверку правильности выбранных условий. [35]
Поскольку некоторое количество света попадает в другие спектральные порядки, пучок света, выходящий из решеточного монохроматора, содержит дополнительные длины волн, существенно отличающиеся от той длины волны, на которую установлен монохроматор. Например, через монохроматор, установленный на 500 нм для спектра первого порядка, будет проходить свет с длиной волны 250 нм из спектра второго порядка. Если монохроматор используется с целью выделения монохроматического света для возбуждения вещества, поглощающего при 500 нм, то в данном случае в некоторой степени могут возбуждаться и другие вещества, не поглощающие при 500 нм, но поглощающие свет 250 нм. Если такие вещества присутствуют в больших количествах, это может приводить к существенным ошибкам. Аналогично, если решеточный монохроматор используется для анализа флуоресценции образца, возбуждаемого светом 250 нм, то можно наблюдать слабый сигнал при 500 нм, возникающий из-за рассеянного возбуждающего света, проходящего через монохроматор во втором порядке спектра. [36]
Образец освещается фильтрованным светом, поляризованным с помощью призмы Глана - - Томпсона в вертикальной или горизонтальной плоскости. Флуоресценцию регистрируют двумя фотоумножителями, расположенными один против другого в направлениях, перпендикулярных направлению распространения возбуждающего света. Через призму Глана - Томпсона перед одним из фотоумножителей проходит только горизонтально поляризованный свет, и сигнал с этого фотоумножителя служит сигналом сравнения. Через призму Глана - Томпсона перед вторым фотоумножителем ( измеряющий фотоумножитель) проходит только вертикально поляризованный свет. Если возбуждающий свет поляризован горизонтально, то пучки флуоресценции образца в направлении обоих фотоумножителей не поляризованы, и поэтому их сигналы пропорциональны / х - Сигналы при этом положении уравнивают с помощью специальной схемы. Для измерения отношения I JI сигналы с фотоумножителей уравниваются поворотом четвертой призмы Глана - Томпсона, через которую свет проходит к измеряющему фотоумножителю. Зная угол поворота, необходимый для уравнивания сигналов с фотоумножителей, можно вычислить отношение / L / / H - В статье Вебера приведено подробное описание прибора, теории измерений и величины систематических ошибок. [37]
Совпадение времен затухания флуоресценции указывает на высокую степень чистоты образца растворителя. Так же тщательно следует очищать и используемые реагенты. Желательно проверять чистоту измерением спектра флуоресценции исследуемого вещества при нескольких длинах волн возбуждения. Если при этом наблюдается изменение формы спектра, то можно предполагать присутствие второго флуоресцирующего вещества. Нужно осторожно относиться к вновь появляющимся полосам флуоресценции. Измерение флуоресценции образца при 77 К увеличивает чувствительность и позволяет обнаружить присутствие малых количеств примеси. [38]
Затем 50 мл приготовленного раствора разбавляют водой до 1 литра. К этому 1 5 % - ному раствору приливают 30 мл 0.1 у-ного раствора люмогаллиона ИРЕА, оставляют ка 1 час, после чего пропускают раствор через колонку с анионитом ЭДЭ-10. Подготовку колонки с анионитом выполняют, как описано на стр. Полученный фильтрат сохраняют в колбе с притертой пробкой и используют в течение 8 - - 10 дней. По истечении этого времени значение рН раствора изменяется, что сказывается на интенсивности флуоресценции образцов. [39]
Для контроля чистоты растворителей часто используют измерение времени затухания флуоресценции вещества в этом образце растворителя и сравнивают найденное значение со значением времени затухания флуоресценции этого вещества в чистом растворителе. Совпадение времени затухания флуоресценции указывает на высокую степень чистоты образца растворителя. Так же тщательно следует очищать и используемые реагенты. Желательно проверять чистоту измерением спектра флуоресценции исследуемого вещества при нескольких длинах волн возбуждения. Если при этом наблюдается изменение формы спектра флуоресценции, можно предполагать присутствие второго флуоресцирующего вещества. Нужно осторожно относиться к вновь появляющимся полосам флуоресценции. Измерение флуоресценции образца при 77 К увеличивает чувствительность и позволяет обнаружить присутствие малых количеств примеси. [40]
Страницы: 1 2 3