Флуорофор

Cтраница 3

ДНК-мишени и не спариваются друг с другом, а 5 концевых нуклеотидов взаимно комплементарны и образуют шпильку. К 5 -концу присоединен флуоресцентный хромофор ( флуорофор), а к 3 -концу - нефлуоресцентный хромофор ( тушитель), на который передается энергия возбуждения флуорофора. В растворе при комнатной температуре маяк имеет такую конфигурацию, при которой флуорофор и тушитель находятся в тесном контакте, и флуоресценция флуорофора тушится. [31]

Спектр флуоресценции дартном растворе 2-нафтиламина. [32]

Значительная чувствительность флуоресценции к внутримолекулярным и межмолекулярным изменениям позволяет выявить взаимодействия молекул, не обнаруживаемые другими методами. Так, ионизация и взаимодействие между молекулами, которые трудно обнаружить спектрофотометрическими методами, могут изменять квантовый выход флуоресценции. Флуорофоры, взаимодействуя со специфическим ферментом, могут увеличить или уменьшить интенсивность его флуоресценции, и по степени изменения интенсивности можно судить о типе связи. Межмолекулярные и внутримолекулярные взаимодействия могут вызвать также изменения в спектрах возбуждения и флуоресценции. [33]

Флуорометры и флуоресцентные спектрофотометры надо ежедневно стандартизовать по стабильному флуорофору для обеспечения правильной воспроизводимости ответа. Изменения обусловлены факторами, связанными с самим прибором, такими, как различия в интенсивности - лашш и чувствительности фотоумножителя. Флуорофором может служить чистый образец флуоресцирующего вещества, подвергаемого анализу, или другое легко очищаемое флуоресцирующее вещество с полосами поглощения флуоресценции такими же, что и у испытуемого вещества. Подходящим флуорофором для голубой флуоресценции является хинин в разведенной серной кислоте, для зеленой флуоресценции - флуоресцеин натрий и для красной - родамин. [34]

Кауфман [10] разработал эмпирическую классификацию органических соединений обладающих заметной флуоресценцией. Основные структуры, общие для всех этих веществ, он назвал люминофорами. В сочетании с флуорогенами люминофоры образуют флуорофоры. [35]

Всякое флуоресцирующее вещество неизбежно является поглощающим, поэтому естественно, что некоторые закономерности теории цветности могут быть перенесены на явления флуоресценции; однако подобная аналогия довольно тривиальна и такие, например, понятия, как бато - и гипсофлор, дублирующие понятия бато - и гипсохромных групп, теории цветности не представляются особо необходимыми, поскольку между спектрами абсорбции и флуоресценции в подавляющем большинстве случаев имеет место вполне определенное соответствие. В то же время основное понятие флуорофора остается чрезвычайно расплывчатым. Исследование спектральных характеристик люминесценции и ее поляризации позволяет думать, что отдельное понятие флуорофора не имеет смысла, если подразумевать под ним систему, в которой происходит излучение. Эта система тождественна с хромофорной системой молекулы, поскольку поглощение света в длинноволновой полосе, обусловливающей окраску соединения, и излучение определяются одними и теми же электронными состояниями молекулы. [37]

Большинство флуоресцентных отбеливающих агентов, ( около 80 % общего количества) являются производными стильбена. Сам стильбен имеет полосу поглощения при 324 нм. Введение ауксо-хромных аминогрупп в 4 4 -положения стильбена смещает полосу поглощения в сторону более длинных волн ( табл. IV. Однако из - стильбенкарбоновых кислот получены ценные флуоресцентные отбеливатели путем использования СООН-группы для присоединения других флуорофоров. Цианостирил-4 - цианостильбен представляет собой ценный оптический отбеливающий агент для полиэфирных волокон. [40]

Метод обращенно-фазовой ВЭЖХ с обнаружением электрохимическим детектором, описанный в работе [127], пригоден для определения в пробах воды микроколичеств некоторых кар-баматных пестицидов, имеющих важное значение и повсеместно применяемых. Поскольку в жидкостной хроматографии увеличение объема вводимого образца не сказывается в заметной степени на качестве разделения [144], предел обнаружения большинства изученных карбаматов можно снизить до величины порядка 10 - 5 % простым увеличением объема образца до 100 мкл. Мойе и др. [140] опубликовали метод ВЭЖХ-разделения и определения семи карбамат-ных инсектицидов, в основе которого лежит получение флуоресцирующих производных путем обработки элюата фталевым альдегидом. Этот метод представляет интерес в связи с тем, что благодаря высокой интенсивности флуоресценции образующегося в результате реакции флуорофора можно обнаруживать нанограммовые количества карбаматных инсектицидов. Более того, детектор реагирует только на появление флуорофора и тех соединений, которые флуоресцируют при этих же длинах волн возбуждения и эмиссии. [41]

Флуоресцентным свойствам бензотриазола и его замещенных посвящено значительное число работ. Правда, многие из них относятся к флуоресценции сложных молекул, содержащих триазольные группировки наряду с другими флуорофорами. В работе [171 ] детально изучены спектры поглощения и люминесценции незамещенного бензотриазола и его катиона, обсуждена их природа. Метил-и 1-фенилбензотриазолы не флуоресцируют. В то время как 1-замещенные бензотриазола флуоресцируют очень слабо, 2-замещенные бензотриазола обладают интенсивной флуоресценцией. Это позволило авторам работы [172] утверждать, что флуорофором ( с испусканием в видимой области спектра) является циклическая система, в которой хиноид-ные связи в значительной степени фиксированы. [43]

Наиболее широко распространены флуориметрические методы, основанные на измерении флуоресценции. При поглощении ультрафиолетового или видимого излучения молекулы переходят в электронно-возбужденное состояние. Полученная энергия может полностью переходить в энергию теплового движения, а может с определенной вероятностью ( квантовым выходом) испускаться в виде рассеянного электромагнитного излучения, как правило, с частотой, меньшей частоты возбуждающего излучения. Это рассеянное излучение называют флуоресценцией. При использовании достаточно чувствительных фотоэлектронных умножителей это позволяет регистрировать концентрации флуорофоров, практически недоступные спектрофотомет-рическому методу. Для веществ с достаточно высоким квантовым выходом флуоресценции удается регистрировать концентрации флуорофора порядка 10 10 М и ниже. [44]

Страницы: 1 2 3