Флуорохромирование

Cтраница 2

Молодые колонии ( 7-часовые бактерий дизентерии, подвергающиеся фаголизису ( увеличение 80х. Колонии прижизненно флуо-рохромированы акридиновым оранжевым. [16]

Ценные результаты по изучению тонкой структуры микробной клетки получены при помощи флуорохромирования акридиновым оранжевым, аурофосфином и берберином. [17]

Метод заключается в концентрировании бактерий из воды на нелюминесцирующий мембранный фильтр, флуорохромировании акридиновым оранжевым, приготовлении препарата и раздельном просчете под люминесцентным микроскопом числа живых ( зеленых) и мертвых ( красных) клеток. [18]

При разработке метода нами были проведены специальные исследования условий приготовления микроскопических препаратов, флуорохромирования и применения различных цитохимических обработок. [19]

Метод заключается в концентрй ровании бактерий из воды на нелюминесцирующий мембранный фильтр, флуорохромировании акридиновым оранжевым, приготовлении препарата и раздельном просчете под люминесцентным микроскопом числа живых ( зеленых) и мертвых ( красных) клеток. [20]

Краситель для обычной и флуоресцентной микроскопии, В бактериологии, микробиологии, гистологии, вирусологии преимущественно для выявления туберкулезных бактерий, гонококков и флуорохромирования нервньтх клеток. [21]

Можно фиксировать и в формалине; следует, однако, помнить, что этот фиксатор вызывает частичную деполимеризацию дезоксирибонуклеиновой кислоты. Флуорохромирование осуществляют водными или спиртовыми растворами флуорохромов ( 1: 1 - 2 тысячи) в течение 10 - 30 секунд или, если концентрация раствора флуо-рохрома еще меньше, несколько дольше. В ряде случаев водные растворы флуорохромов целесообразно готовить на буферных растворах. [22]

Флуорохромирование проводят либо прижизненное, либо на фиксированных препаратах. Прижизненное флуорохромирование в свою очередь может быть осуществлено или на целом животном или растительном организме ( путем инъекции или введения с пищей), или на отдельных тканях и клетках. Прижизненное флуорохромирование особенно полезно при исследованиях функционального состояния и физико-химической характеристики органов, тканей и клеток. [23]

Этот краситель дает яркую флуоресценцию всех микроорганизмов природной воды, разнообразных по видовому составу, хорошо дифференцирует бактериальные клетки от посторонних частичек. Лучшие результаты получены при флуорохромировании бактерий не в объеме пробы, а непосредственно на мембранном фильтре при помещении его бактериями вверх на поверхность раствора флуорохрома. Время флуорохромирования 15 мин при температуре 20 С. Необходимым условием является высушивание мембранных фильтров до и после флуорохромирования. Разработан ускоренный вариант метода. В этом случае для флуорохромирования используют горячий ( 70 С) раствор лактата этакридина, время экспозиции сокращают до 2 мин, а мембранные фильтры высушивают сухим жаром, что сокращает продолжительность операции в 10 раз. [24]

По нашим данным, акридиновый оранжевый весьма пригоден для обнаружения внутриклеточных вирусных включений. Но данным Авакяна с сотрудниками прижизненное флуорохромирование этим красителем крайне ускоряет и упрощает обнаружение патологических изменений в клетках культуры тканей, зараженных вирусом полиомиелита, что весьма полезно для диагностики этого заболевания. [25]

Вирусные включения, возникающие при поражении вирусом мозаики растений табака, огурца, лука и других, не люминесцируют. Для их выявления был использован прием флуорохромирования с применением люминесцентной микроскопии. [26]

Мейсель и Корчагин [12] на выделенных из клеток нуклеиновых кислотах и их производных показали, что акридиновый оранжевый, связываясь с дезоксирибонуклеиновой кислотой ( ДНК) или ДНК-протеидом, придает им ярко-зеленую люминесценцию, в то время как комплексы этого флуорохрома с рибонуклеиновой кислотой ( РНК) и ее протеидом люмине-сцируют красным светом. Такие соотношения ими были обнаружены в случае прижизненного флуорохромирования клеток. Акридиновый оранжевый в этих условиях оказался весьма полезным цитохимическим реактивом. Различная степень связывания акридинового оранжевого с ДНК и РНК зависит, по-видимому, от различной степени полимеризации этих кислот. [27]

Вследствие очень высокой чувствительности люминесцентного метода для окрашивания используют сильно разведенные растворы флуорохромов ( С-10 - - 5 - 5 - 10 - 6 моль / л), химическое воздействие которых на исследуемый объект, и в частности на клетки организма, невелико. Это позволяет путем внутривенного или подкожного вливания проводить прижизненное флуорохромирование отдельных органов человека и животных, что имеет исключительно важное значение при биологических исследованиях. [28]

Подавляющее большинство микроорганизмов не обладает сколько-нибудь выраженной и характерной собственной люминесценцией. В этих случаях целесообразно производить исследование собственной люминесценции, во всех же остальных случаях приходится прибегать к флуорохромированию. Например, при изучении препаратов и мазков из тканей и жидкостей, подучае мых из организма животных и человека, образцов почв, а также центри-фугатов воды, водных смывов с различных предметов непосредственное флуорохромирование позволяет быстро и надежно обнаруживать в них бактерии и производить их количественный учет. О видовой принадлежности бактерий, выявленных прямым флуорохромированием, без дополнительных исследований судить трудно. [29]

В Ленинградском филиале ВНИИ медицинского приборостроения при нашем консультативном участии разработан метод и на его основе прибор для определения общей микробной ( белковой) загрязненности воды с применением флуорохромирования. [30]

Страницы: 1 2 3 4