Иммуносорбент
Cтраница 1
Иммуносорбенты на основе иммобилизованной глицеральдегид-3 - фосфатдегидрогеназы из дрожжей получают при степени активации сефарозы 150 мг BrCN на 1 г геля. [1]
Среди прочих иммуносорбентов фирма Miles-Seravac выпускает нерастворимые гаптены: связанные с агарозой дииитрофе-нол, арсаниловую, гиббереллиновую и 3-индолилуксусную кислоты. Для выделения антител предназначены следующие связанные с агарозой антигены: бычий сывороточный альбумин, человеческие и козлиные иммуноглобулины. Для выделения антигенов производятся связанные с агарозой антитела против бычьего альбумина, гормона роста, глюкагона, человеческого IgG, динитрофенола, гиббереллиновой кислоты и 3-индолилук-сусной кислоты. [2]
 |
Схема экстракорпоральной системы кровообращения. [3] |
По-видимому, иммуносорбенты в будущем могут быть использованы в медицине. [4]
Для синтеза иммуносорбента Protein A-Sepharose CL - 4B смешивали с антителами в ОД М боратном буфере ( рН 8 2) и осторожно встряхивали 30 мин при комнатной температуре. Затем сорбент промывали буфером ( 0 2 М раствор триэтаноламина, рН 8 2), суспендировали в 20 объемах 0 01 - 0 08 М раствора диметилпимелимидатдигидрохлорида ( фирмы Pierce) в таком же буфере и выдерживали 45 мин при комнатной температуре. [5]
Отметим, что на эффективность иммуносорбента с иммобилизованными антителами может существенным образом влиять выбор спейсера. В этом плане показателен следующий пример. [6]
Многочисленные примеры из обширной области использования иммуносорбентов обоих типов ( с иммобилизованными антителами и антигенами) были приведены в предыдущей книге данной серии [ Остерман, 1983 ], поэтому мы ограничимся лишь тремя примерами, относящимися к рассматриваемой проблеме аффинной очистки нуклеиновых кислот. С помощью иммуносорбентов здесь удается решить довольно своеобразные задачи. [7]
Для пары антиген - антитело на иммуносорбенте вариации могут быть. [8]
Иммобилизованные ферменты могут быть использованы в качестве иммуносорбентов для выделения из антисыворотки специфических антител на эти ферменты. [9]
Этот метод неконкурентного сэндвича состоит из трех стадий: 1) определяемый антиген реагирует с покрытым антителами целлюлозным иммуносорбентом; 2) меченные ферментом антитела инкубируют с антигеном, связанным на твердой фазе; 3) затем измеряют ферментативную активность иммуносорбента. В качестве примера применения этого метода может служить определение а-фетопротеина. Использование ферментативного иммуноанализа позволило Като и др. [619] определять такие небольшие количества иммуноглобулина G человека, как 3 фмоль. [10]
В силу того что растворимость антигена ТТГ и антител к нему достаточно близки, для получения специфических антител из иммунной сыворотки был применен иммуносорбент - аминоцеллюлоза, и выделение антител к ТТГ проводили по методу, разработанному Гурвичем в Институте микробиологии и эпидемиологии им. [11]
Так, в сыворотках морских свинок, сенсибилизированных конъюгатом Cr-ГГЧ, в одинаковом титре были обнаружены антитела как против этого конъюгата, так и против Сг-САЧ, причем истощение сывороток иммуносорбентом носителя вызывало в обоих вариантах одинаковое снижение титра. [12]
Этот метод неконкурентного сэндвича состоит из трех стадий: 1) определяемый антиген реагирует с покрытым антителами целлюлозным иммуносорбентом; 2) меченные ферментом антитела инкубируют с антигеном, связанным на твердой фазе; 3) затем измеряют ферментативную активность иммуносорбента. В качестве примера применения этого метода может служить определение а-фетопротеина. Использование ферментативного иммуноанализа позволило Като и др. [619] определять такие небольшие количества иммуноглобулина G человека, как 3 фмоль. [13]
Препараты сефарозы с глицеральдегид-3 - фосфатдегидрогеназой, иммобилизованной при разной степени активации, помещают в колонки ( размер 0 5x3 см) и уравновешивают 0 15 М раствором NaCl. Иммуносорбент отмывают от балластных белков 0 15 М раствором NaCl до исчезновения поглощения при длине волны 280 нм в элюате. [14]
Лигандами БСС могут быть ферменты, коферменты, субстраты, активаторы, ингибиторы, гормоны и другие вещества. Эффективные иммуносорбенты получают укреплением на носителе антигенов - белков или гаптенов. Такие иммуно-юрбенты отличаются высокой активностью и. Близко к БСС стоят так называемые инсолюбилизиро - 1анные, или водонерастворимые ферменты ( Е р t о п К. Многократность использования инсолюбилизированных юрментов дает большой экономический эффект, если учесть высокую стоимость ногих ферментов. Весьма ценно также то, что водонерастворимые ферменты или другие активные вещества) можно использовать не только в статических, о и в динамических условиях, для проведения реакции на колонках. [15]
Страницы: 1 2