Cтраница 2
Если животному не вводить обратно эритроциты, удаленные из организма при кровопускании, то можно изучать одновременно и скорость регенерации гемоглобина. Как уже указывалось выше, максимальное количество белков плазмы, образующееся в организме собаки, равно примерно 1 г в день на 1 кг веса тела животного. Общее же количество белков плазмы и гемоглобина, образующихся за день, никогда не превышает 1 5 г на 1 кг веса тела собаки, причем характер образующихся белков в значительной мере зависит от аминокислотного состава вводимых белков. [16]
При рассмотрении вопросов, касающихся электрофореза белков, уже указывалось, что водные растворы белков обладают большим показателем преломления, чем вода, и что это обстоятельство может служить для определения положения подвижной границы при электрофорезе. Показатель преломления растворов белка линейно возрастает по мере увеличения концентрации белка в растворе. Этот прирост слегка варьирует в зависимости от характера белка. Температура и наличие в растворе солей не влияют заметным образом на удельный прирост преломления, поэтому концентрация белка в растворе может быть определена весьма быстро путем измерения показателя преломления раствора и вычитания из него показателя преломления диализата. [17]
Первая из этих трех задач - практическая - имеет большое историческое значение и продолжает играть важную роль при приготовлении биологических препаратов и в технологии получения белков. Некоторые вопросы, касающиеся приготовления и свойств токсинов и вакцин, будут рассмотрены в отдельных статьях следующих томов настоящего сборника. В обзоре Густавсона [3] изложены результаты исследования связи между характером белков и химическими процессами при дублении. Процессы, используемые для видоизменения белков с целью их промышленного применения, в принципе сходны с описываемыми ниже реакциями белков. Различие заключается лишь в том, что в промышленности используются более жесткие условия обработки и в меньшей степени заботятся о специфичности протекания реакции. [18]
На основании некоторых явлений, не находящихся в непосредственной связи с катализом, известно, что в результате связывания с белком свойства вещества могут подвергаться глубокому изменению. Наоборот, гемоглобин, образующийся в результате связывания тема с белком - глобином, является растворимым в воде веществом, образующим обратимое соединение с молекулами кислорода - оксигемоглобин, в котором железо сохраняет двухвалентное состояние. Известны и другие протеиды, содержащие связанный гем, но с другими белками, чем с глобином, например пероксидаза, каталаза, цитохром и дыхательный фермент Вар-бурга. Ни один из этих протеидов не связывается обратимо с кислородом, но некоторые из них обратимо окисляются в формы с трехвалентным железом. Естественно, что эти различия в поведении обусловлены характером соответствующих белков, так как простетическая группа - гем - одна и та же во всех случаях. [19]
После сушки каждую полоску увлажняют 50 - 70 [ хд свежеприготовленного 20 % - ного раствора фенилизотиоцианата в диоксане, не содержащем перекиси. Затем полоски промывают несколько раз бензолом, слегка встряхивая их, причем каждый раз берут новую порцию бензола. Далее полоски промывают равными частями абсолютного этанола и эфира, не содержащего перекиси. Промывание продолжают до тех пор, пока оптическая плотность при 270 м 1 4 мл жидкости после встряхивания в течение 2 - 3 час будет ниже 0 025; этого обычно достигают через 24 час. Эксикатор эвакуируют до остаточного давления 100 мм рт. ст. Через 4 - 16 час ( в зависимости от характера белка) бумагу проветривают и отщепившийся фенилтиогидантоин экстрагируют смесью этанол - эфир. N-концевая группа аминокислоты определяется либо непосредственно хроматографированием фенилтиогидантоина, либо в виде свободной аминокислоты после гидролиза фенилтиогидантоина. После экстракции смесью этанол - эфир полоски считаются готовыми для дальнейшей стадии разложения. [20]
Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из мембран с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. Адсорбционная хроматография на оксиапатите фигурирует в качестве одного из этапов при выделении многих рестриктаз. Сравнительно высокая концентрация элюирующего буфера и заметный сдвиг рН в щелочную сторону указывают на менее кислый, чем в предыдущем случае, характер белка. [21]
Рибонуклеиновые кислоты - полимерные молекулы, которые по своей структуре подобны ДНК. Отличительной особенностью РНК является то, что углеводной компонентой в них является D-рибофураноза, а место тимина занимает урацил. Последовательность оснований в скелете природных РНК еще не известна; причем в противоположность ДНК, РНК состоят из простых поли-нуклеотидных цепей, в структуре которых последовательность пуриновых и пиримидиновых оснований варьируется в значительно меньшей степени, чем в нуклеотидном составе ДНК. В зависимости от характера выполняемых функций РНК делятся на три группы. Это прежде всего рибосомальные РНК, являющиеся основным компонентом клетки. Полагают, что рибосомальные РНК участвуют в создании клеточных образований - рибосом, однако их функция окончательно не выяснена. Информационные РНК являются как бы шаблонами в синтезе белка и составляют активную часть полирибосом. Так, характер синтезируемого белка зависит от последовательности оснований ( А, Ц, У и Г) в полинуклеотидной цепи информационной РНК. Наконец, третья форма - растворимые РНК, являются как бы адаптором аминокислот, направляющим аминокислоты к специальным участкам ( шаблонам) информационной РНК, осуществляющей синтез белка. [22]
Рибонуклеиновые кислоты - полимерные молекулы, которые по своей структуре подобны ДНК. Отличительной особенностью РНК является то, что углеводной компонентой в них является D-рибофураноза, а место тимина занимает урацил. Последовательность оснований в скелете природных РНК еще не известна; причем в противоположность ДНК, РНК состоят из простых поли-нуклеотидных цепей, в структуре которых последовательность пуриновых и пиримидиновых оснований варьируется в значительно меньшей степени, чем в нуклеотидном составе ДНК. В зависимости от характера выполняемых функций РНК делятся на три группы. Это прежде всего рибосомальные РНК, являющиеся основным компонентом клетки. Полагают, что рибосомальные РНК участвуют в создании клеточных образований - рибосом, однако их функция окончательно не выяснена. Информационные РНК являются как бы шаблонами в синтезе белка и составляют активную часть полирибосом. Так, характер синтезируемого белка зависит от последовательности оснований ( А, Ц, У и Г) в полинуклеотидной цепи информационной РНК. Наконец, третья форма - растворимые РНК, являются как бы адаптером аминокислот, направляющим аминокислоты к специальным участкам ( шаблонам) информационной РНК, осуществляющей синтез белка. [23]
Денатурация охватывает разнообразные явления. Сущность процесса недостаточно еще выяснена. Этот процесс, по-видимому, связан с известными структурными изменениями самой молекулы белка, протекающими без разрыва внутренних пептидных связей. Талмуд дает следующую молекулярао-фивическую картину тепловой денатурации. Нагревание расшатывает глобулу белка. Это ведет к растягиванию последней, причем гидрофобные участки, которые ранее были спрятаны в ядре глобулы, теперь приходят в соприкосновение с водой, тем самым гидрофобизи-руя поверхность белковой частицы. Кроме того, при растягивании глобулы облегчается агрегирование полипептидных цепей по месту неполярных участков. Возможно, что при денатурации происходит взаимодействие карбоксильных и аминных групп, причем амфионный характер белка изменяется. Предполагают появление в белке при его денатурации некоторых новых радикалов, не характерных для нативного белка. [24]