Cтраница 4
Механизм ингибирующего действия также различен, но в своем большинстве сводится к двум типам торможения: конкурентному и неконкурентному. При добавлении большого количества субстрата ( вытеснении ингибитора) активность фермента восстанавливается. Если торможение реакции не снимается добавленным субстратом, происходит неконкурентное ингибирование. [46]
Это означает, что при достаточно высокой концентрации субстрата [ S ] ингибитор вытесняется молекулами субстрата из комплекса EI. При неконкурентном ингибировании ( рис. 4.22) ингибитор снижает величину максимальной скорости. Если при этом величина Кш не уменьшается, то говорят о полностью неконкурентном ингибировании. [47]
На рис. 6.12 - 6.14 ыожно отметить еще одну деталь. График, приведенный на рис. 6.13, иллюстрирует такой случай. Однако необходимо указать, что такая ситуация имеет место только в особых случаях неконкурентного ингибирования, и тогда его называют простым линейным неконкурентным ингибированием. [48]
В заключение следует подчеркнуть, что эти уравнения выведены в предположении, согласно которому реакции распада комплексов ( ЕА) и ( EAQ) протекают сравнительно медленно, так что они заметным образом не влияют на равновесие между свободной и связанной формами фермента, участвующими в реакции. Полный анализ этого вида неконкурентного ингибирования методами стационарной кинетики дает столь сложные уравнения, что пользоваться ими практически невозможно. Моралес [1 1], однако, показал, что выведенные здесь уравнения ( уравнения для чисто неконкурентного ингибирования) строго применимы только для равновесных условий. Точное соответствие опытных данных выведенным уравнениям можно даже рассматривать как признак того, что равновесные условия действительно достигнуты. [49]
Метод Диксона обладает тем преимуществом, что он позволяет определять значение константы ингибирования непосредственно из кинетических данных, не прибегая к дополнительным построениям. С другой стороны, вид графика в координатах Диксона не позволяет отличить смешанный тип ингибирования от конкурентного или неконкурентного ингибирования, как это обычно можно сделать при построении в координатах Лайнуивера-Берка. [50]
В некоторых случаях ингибитор прекращает каталитическую функцию фермента путем присоединения к активному центру. В этом случае говорят, что происходит конкурентное ингибиро-вание. Если место активного центра и место присоединения ингибитора расположены на разных участках поверхности фермента, то говорят о неконкурентном ингибировании. [51]
На рис. 6.12 - 6.14 ыожно отметить еще одну деталь. График, приведенный на рис. 6.13, иллюстрирует такой случай. Однако необходимо указать, что такая ситуация имеет место только в особых случаях неконкурентного ингибирования, и тогда его называют простым линейным неконкурентным ингибированием. [52]
Ингибитор мешает присоединению субстрата к ферменту, конкурируя с ним. Такое торможение называется конкурентным или компетитивным. В случае повышения концентрации субстрата торможение прекращается. При неконкурентном ингибировании ингибитор присоединяется не там, где связывается субстрат и от внесения избытка субстрата фермент не освобождается. В случае неконкурентного ингибирования фермент может одновременно связываться и с ингибитором, и с субстратом. [53]
Обратимые неконкурентные ингибиторы понижают Vmax, но поскольку ингибиторы этого типа не мешают связыванию субстрата с активным центром фермента, величина Кт не меняется. Механизм ингибирования состоит в снижении скорости, с которой субстрат в составе фермент-субстратного комплекса превращается в продукт. Именно поэтому при неконкурентном ингибировании уменьшается лишь величина Утах. [54]