Активный центр - химотрипсин
Cтраница 1
Активный центр химотрипсина может быть ковалентно помечен квазисубстратами, в том числе тг-нитрофенилацетатом, диизопропилфторфос-фатом и неактивированиым метиловым эфиром коричной кислоты. [1]
Активный центр химотрипсина может быть ковалентно помечен также специфическим субстратом, N-ацетилтриптофаном. Поскольку химотрипсин предпочтительно расщепляет пептидные связи, образованные остатками триптофана и тирозина, этот эксперимент является веским доказательством в пользу гипотезы о существовании ацилфермента. [2]
 |
Схема действия ацетилхолинэстеразы. [3] |
Анализ работы активного центра химотрипсина приводит к выводу, что фермент действует на ( молекулу субстрата одновременно в нескольких точках; такое соединенное воздействие различных атомных групп называют кооперативным. Благодаря этому эффекту даже слабые взаимодействия, суммируясь, могут произвести значительные изменения в структуре молекулы. [4]
Функциональные группы активного центра химотрипсина идентифицированы с помощью необратимых ингибиторов. Остаток Ser-195 был модифицирован диизопропилфторфосфатом и фенил-метилсульфофторидом, а остаток His-57 - г4 - тозил - Ь - фенилала-нил-хлорметилкетоном ( см. рис. 89 и с. Двухстадийность процесса химотрипсинового гидролиза была обнаружена при изучении кинетики гидролиза п-нитрофени л ацетата. [5]
Представление об активном центре химотрипсина как структуре, состоящей из пространственно и функционально разделенных участков ( сорбционного и каталитического), в литературе сложилось раньше [102], чем появились рентгеновские данные о структуре кристаллического фермента. Использованные подходы могут оказаться весьма полезными при изучении структуры и функций активного центра других ферментов. [6]
Краситель профлавин связывается с активным центром химотрипсина, при этом спектральные свойства его изменяются. [7]
Поскольку специфическое взаимодействие углеводородных субстратных фрагментов с активным центром химотрипсина гидрофобно ( см. § 2 и 4 этой главы), то специфический член S в уравнении (4.25) разумно представить в виде функции от показателя гидрофобности заместителя R. [8]
Следует упомянуть еще об одном предположении относительно структуры активного центра химотрипсина, поскольку оно пользуется некоторой популярностью. [9]
Гидролиз субстратов ( сложных эфиров, амидов) на активном центре химотрипсина протекает в несколько стадий. На последующих стадиях наблюдается химическое превращение сорбированной молекулы с промежуточным образованием ацилфермента ЕА. [10]
Получены экспериментальные доказательства того, что гистидин входит в состав активного центра химотрипсина. При обработке фермента Ь-1-тозиламидо-2-фенилэтилхлор-метилкетоном ( ТФХК) один из двух остатков гистидина в молекуле химотрипсина алкили-руется, что сопровождается полной утратой ферментативной активности. Если фермент предварительно инкубировать с ДФФ, то алки-лирования не происходит. Алкилирование не идет также в растворе 8 М мочевины. В полипептидной цепи фермента этот остаток гистидина расположен далеко от активного серина и должен поэтому приблизиться к активному серину за счет изгиба пептидной цепи. Можно предполагать, что за счет изгибания пептидной цепи с активным серином сближается также та часть молекулы фермента, которая определяет его специфичность. Таким образом, представление об активном центре фермента отличается достаточной сложностью. [11]
Группа с рК 6 6 принадлежит гистидину 33, гомологичному гистидину 57 в активном центре химотрипсина быка; группа с рК2 9 5 не идентифицирована. Предполагается, что так же, как в панкреатических сериновых проте-иназах ( трипсине, химотрипсине и эластазе), ею может быть а-амино-группа N-терминальной аминокислоты, которая образует ионную пару с ( 3-карбоксильной группой аспарагиновой кислоты. [12]
Изменение среды в результате добавки органических соединений также оказывает заметное влияние на эффективность сорбции на активном центре химотрипсина гидрофобных компонентов реакции. [13]
Третье предположение было выдвинуто Каннингемом [31 ], который считал, что хотя р / С фосфорилируемой группы активного центра химотрипсина и подтверждает участие гистидина в реакции, но теплота ионизации этой группы ( определенная по изменению р / С в зависимости от температуры) выше, чем найденная для гистидина. Его гипотеза применима также и для холинэстеразы. [14]
Цис - и граяс-изомеры ацилферментов коричной и нитрокорич-ной кислот были выделены в индивидуальном виде, изучены их спектральные характеристики, процесс цис-гранс-фотоизомеризацйи циннамоильных групп в активном центре химотрипсина, исследована кинетика гидролиза. В табл. 11 приведены кинетические характеристики цис и грамс-изомеров субстратов в реакции ацилирования ( k2 / Ks) и деацшшрования образующихся ацилферментов. Видно, что траяс-стереоизомеры в 103 - 104 раз более реакционноспособны, чем соответствующие цыс-формы. [15]
Страницы: 1 2