Комплементарные цепи
Cтраница 3
ДНК на приемлемом расстоянии друг от друга, ферментативного построения с помощью термостабильной ДНК полимеразы новых цепей по существующим од-ноцепочечным матрицам ДНК с использованием в качестве затравки данных праймеров. В результате последовательного циклического проведения всех этих этапов после 25 - 30 или даже 60 циклов образуется требуемый продукт ДНК, ограниченный участками отжига праймеров. Применение в качестве строящего комплементарные цепи ДНК фермента термостабильиой ДНК полимеразы снимает проблему необходимости постоянного добавления новых порций фермента после очередной денатурации, поскольку обычные ДНК полимеразы не выдерживают такого нагрева и теряют свою активность. [31]
При консервативном типе репликации исходная ДНК остается неизменной во время всего процесса репликации и дочерние ДНК полностью состоят из вновь синтезированной ДНК - При полуконсервативном типе репликации в каждом акте репликации половина родительской ДНК переходит в дочернюю. Полуконсервативная схема репликации была предложена Уотсоном и Кри ком как логическое дополнение к созданной ими модели строения ДНК. Они предположили, что при репликации комплементарные цепи двойной спирали ДНК раскручиваются и каждая из них служит матрицей для синтеза новой цепи ДНК. Рассматривались также и другие механизмы, с помощью которых может осуществляться полуконсервативный тип репликации. [32]
В живых клетках данная информация, вероятно, является решающей для преобразования неупорядоченной полипептидной цепи во время или после ее биосинтеза на рибосоме в структуру нативной молекулы белка. С водородные связи между основаниями разрываются, и комплементарные цепи расходятся - ДНК денатурирует. Однако при медленном охлаждении комплементарные цепи могут вновь соединяться в регулярную двойную спираль. [33]
В живых клетках данная информация, вероятно, является решающей для преобразования неупорядоченной полипептидной цепи во время или после ее биосинтеза на рибосоме в структуру нативной молекулы белка. С водородные связи между основаниями разрываются, и комплементарные цепи расходятся - ДНК денатурирует. Однако при медленном охлаждении комплементарные цепи могут вновь соединяться в регулярную двойную спираль. [34]
При нагревании нативной бактериальной ДНК наблюдается область перехода, сходная ( но более узкая) с областью перехода для более гетерогенной ДНК тимуса теленка. Охлаждение до комнатной температуры нагретого раствора бактериальной ДНК так же, как и в случае ДНК тимуса теленка, позволяет понизить поглощение почти до той же величины ( на 10 % больше), которую имел раствор пативной ДНК до нагревания ( фиг. При этом кривая, получаемая при повторном нагревании, зависит от скорости предшествовавшего охлаждения. При повторном нагревании медленно охлаждавшегося раствора кривая поглощения имеет плато и затем в области перехода круто идет вверх, что, как и в случае нативной ДНК, связано с плавлением двойных спиралей. Это свидетельствует о том, что при медленном охлаждении комплементарные цепи имеют возможность соединиться, в результате чего образуется так называемая ренатурированная ДНК. [35]
 |
Схема этапов ПЦР. [36] |
Затем температуру снижают до 45 - 65 С ( в зависимости от состава олигонуклеотидов) и выдерживают ее 1 0 - 1 5 мин. При этом к образовавшимся в результате денатурации одноцепочечным ДНК присоединяются праймеры - один к 3 -концу выбранного для удвоения участка, второй - к 5 -концу. Этот этап называют отжигом. На третьем этапе поддерживается температура 72 С. Данный фермент, используя дезоксинуклеозидтрифосфа-ты, содержащиеся в смеси, достраивает комплементарные цепи ДНК, начиная с 3 -концов праймеров навстречу друг другу. [37]
Страницы: 1 2 3