Флуоресцирующие антитело
Cтраница 1
Флуоресцирующие антитела представляют собой гамма-глобу-линовые фракции иммунных агглютинирующих сывороток, химически соединенные с флуорохромами. [1]
Флуоресцирующие антитела применяются в рабочем титре ( разведении), который предварительно проверяется при взаимодействии их со специфическим антигеном. Предметные стекла ( хорошо обезжиренные), пипетки, чашки Петри, длинный пинцет, сосуд для промывки препаратов. [2]
Процесс соединения флуоресцирующих антител с гомологичными микробными клетками в капиллярном пространстве протекает более активно и быстро, чем при нанесении их на мазок, в результате чего отпадает необходимость выдерживать препарат во влажной камере термостата в течение 30 мин, как это делается при классическом способе применения флуоресцирующих антител по Кунсу. Для снижения флуоресценции фона и повышения контрастности специфической флуоресценции микробных клеток в капиллярное пространство мазка вводят капельку неполярной и нефлуоресцирующей жидкости, например диметилфталата, которая устраняет неспецифическую флуоресценцию фона; специфическая же флуоресценция клеток сохраняется. После этого препарат изучают под люминесцентным микроскопом, используя иммерсионную оптику. [3]
РИФ ( метод флуоресцирующих антител) применяются для индикации возбудителей заразных заболеваний, изучения антигенной структуры микроорганизмов и других биологических объектов, а также при определении вида антител и их уровня в сыворотках больных людей и иммунизированных животных. Они основаны на свойстве флуоресцирующих антител специфически соединяться с гомологичными антигенами микробов, риккетсий, вирусов и других биологических объектов и вызывать их свечение в фиолетовом и ультрафиолетовом свете люминесцентного микроскопа. Флуоресцирующие антитела являются своеобразными иммунохимическими индикаторами на патогенные микроорганизмы и антигенные структуры животных и растительных организмов. Они представляют собой иммунные сыворотки или их гамма-глобулиновые фракции, химически соединенные с флуорохромами, то есть с веществами, обладающими способностью светиться ( флуоресцировать) в ультрафиолетовых и фиолетово-синих лучах. [4]
Метод иммунофлуоресценции или метод флуоресцирующих антител ( МФА) связан с использованием люминесцентного варианта реакции антиген - антитело, происходящей при соединении антигенов с однозначно соответствующими им специфическими антителами, меченными флуорохромами. Иммунологическая сущность метода сводится к однофазовой, включающей лишь специфическую фазу, серологической реакции. Особенность этой реакции состоит в том, что в сыворотку или, точнее, в молекулу антитела вводят флуорохром, в результате чего образуется новое соединение - флуоресцирующее антитело. [5]
Метод индикации патогенных микробов при помощи флуоресцирующих антител характеризуется специфичностью, свойственной серологическим реакциям, и высокой чувствительностью люминесцентной микроскопии. Он позволяет идентифицировать отдельные микробные клетки, попадающие в поле зрения люминесцентного микроскопа. Принципиально с помощью метода флуоресцирующих антител можно обнаруживать возбудителей всех известных в настоящее время инфекционных заболеваний, изучать и дифференцировать антигены клеток, тканей, органов животных и растительных организмов. Для этого необходимо располагать соответствующими специфическими иммунофлуоресцентными препаратами. [6]
Использование иммунофлуоресцентных дисков является наиболее простой и удобной формой применения флуоресцирующих антител. С помощью их значительно упрощается хранение, транспортировка флуоресцирующих антител и их использование не только в стационарных, но и в полевых условиях работы лабораторий. [7]
Число специфических клеток микроорганизмов в природных образцах может быть установлено с помощью применения техники флуоресцирующих антител. [8]
Метод иммунофлуоресценции в притертом препарате значительно повышает чувствительность люминесцентной микроскопии и позволяет при незначительном расходовании флуоресцирующих антител производить в течение кратчайшего срока ( 5 - 7 мин) специфическую индикацию патогенных бактерий. [9]
Это явление обусловлено дальнейшей постепенной диссоциацией комплекса частица целлюлозы флуореоцирующие антитела под воздействием специфического микроба, в результате чего освободившиеся флуоресцирующие антитела соединяются специфическими более прочными связями с гомологичными антигенами микробной клетки, тем самым усиливая ее специфическую флуоресценцию. При микроскопии препаратов заметно, что эти бактерии становятся более крупными из-за наслаивания на их поверхности молекул специфического флуоресцирующего белка. Ободок вокруг клетки становится очень выраженным, он достигает сверхяркой флуоресценции на 5 и б - f -, чего никогда не наблюдается при обработке клеток с помощью прямого и непрямого метода флуоресцирующих антител. [10]
Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. [11]
Процесс соединения флуоресцирующих антител с гомологичными микробными клетками в капиллярном пространстве протекает более активно и быстро, чем при нанесении их на мазок, в результате чего отпадает необходимость выдерживать препарат во влажной камере термостата в течение 30 мин, как это делается при классическом способе применения флуоресцирующих антител по Кунсу. Для снижения флуоресценции фона и повышения контрастности специфической флуоресценции микробных клеток в капиллярное пространство мазка вводят капельку неполярной и нефлуоресцирующей жидкости, например диметилфталата, которая устраняет неспецифическую флуоресценцию фона; специфическая же флуоресценция клеток сохраняется. После этого препарат изучают под люминесцентным микроскопом, используя иммерсионную оптику. [12]
По истечении указанного срока препарат вынимают из влажной камеры ( нанесенный конъюгат иногда частично удаляют встряхиванием) и промывают в двух - четырех сменах забуференного физраствора ( рН 7 2 - 7 4) в течение 10 - 15 мин с последующим споласкива-нием в дистиллированной воде или промывают в проточной водопроводной воде в течение 5 - 10 мин с целью удаления с мазка избытка флуоресцирующих антител, которые не соединились с антигеном. [13]
Меченые сыворотки не утрачивают своей иммунологической специфичности и способны давать с гомологичными антигенами феномены реакции агглютинации или преципитации. Следовательно, флуоресцирующие антитела являются своеобразными иммунохимическими индикаторами, обладающими специфическим родством к гомологичному антигену. Метод флуоресцирующих антител поэтому позволяет производить специфическую идентификацию отдельных микробных клеток. [14]
Страницы: 1 2