Cтраница 2
У взрослого млекопитающего каждое волокно скелетной мышцы имеет в норме лишь один синапс, и почти все ацетилхолиновые рецепторы сосредоточены на участке мембраны, лежащем под окончанием аксона; концентрация этих рецепторов здесь более чем в тысячу раз выше, нежели в областях, удаленных от синапса. С помощью флуоресцирующих антител ( см. разд 6.2.15) было доказано, что рецепторы в области синапса каким-то образом закреплены и не могут свободно перемещаться в плоскости мембраны. Кроме того, эти белки лишь медленно обновляются-время их службы составляет не меньше пяти дней. [16]
РИФ ( метод флуоресцирующих антител) применяются для индикации возбудителей заразных заболеваний, изучения антигенной структуры микроорганизмов и других биологических объектов, а также при определении вида антител и их уровня в сыворотках больных людей и иммунизированных животных. Они основаны на свойстве флуоресцирующих антител специфически соединяться с гомологичными антигенами микробов, риккетсий, вирусов и других биологических объектов и вызывать их свечение в фиолетовом и ультрафиолетовом свете люминесцентного микроскопа. Флуоресцирующие антитела являются своеобразными иммунохимическими индикаторами на патогенные микроорганизмы и антигенные структуры животных и растительных организмов. Они представляют собой иммунные сыворотки или их гамма-глобулиновые фракции, химически соединенные с флуорохромами, то есть с веществами, обладающими способностью светиться ( флуоресцировать) в ультрафиолетовых и фиолетово-синих лучах. [17]
Антитела являются чрезвычайно специфичными по отношению к выбранному виду, что в целом делает этот метод поразительно точным инструментом исследования. Модификациями метода являются применение специфичных флуоресцирующих антител, выработанных по отношению к определенным ферментам, а также использование флуоресцирующих генетических проб ( генных зондов), позволяющих идентифицировать микроорганизмы с одинаковыми генами в популяции. В одной и той же популяции можно обнаружить различные гены, имея генетические зонды, флуоресцирующие разным цветом. [18]
Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. [19]
Использование иммунофлуоресцентных дисков является наиболее простой и удобной формой применения флуоресцирующих антител. С помощью их значительно упрощается хранение, транспортировка флуоресцирующих антител и их использование не только в стационарных, но и в полевых условиях работы лабораторий. [20]
Установление этиологии конъюнктивита предполагает сбор анамнеза ( жалобы и субъективные ощущения больного, начало заболевания, время обращения к врачу, вид и продолжительность самостоятельного лечения до обращения к специалисту), офтальмологическое обследование больного ( осмотр переднего отрезка глаза при боковом освещении, биомикроскопия обоих глаз с помощью стационарной или ручной щелевой лампы в прямом, проходящем и отраженном свете), микробиологические, цитологические исследования, метод флуоресцирующих антител ( МФА), вирусологический и иммунологический методы исследования. [21]
РИФ ( метод флуоресцирующих антител) применяются для индикации возбудителей заразных заболеваний, изучения антигенной структуры микроорганизмов и других биологических объектов, а также при определении вида антител и их уровня в сыворотках больных людей и иммунизированных животных. Они основаны на свойстве флуоресцирующих антител специфически соединяться с гомологичными антигенами микробов, риккетсий, вирусов и других биологических объектов и вызывать их свечение в фиолетовом и ультрафиолетовом свете люминесцентного микроскопа. Флуоресцирующие антитела являются своеобразными иммунохимическими индикаторами на патогенные микроорганизмы и антигенные структуры животных и растительных организмов. Они представляют собой иммунные сыворотки или их гамма-глобулиновые фракции, химически соединенные с флуорохромами, то есть с веществами, обладающими способностью светиться ( флуоресцировать) в ультрафиолетовых и фиолетово-синих лучах. [22]
Меченые сыворотки не утрачивают своей иммунологической специфичности и способны давать с гомологичными антигенами феномены реакции агглютинации или преципитации. Следовательно, флуоресцирующие антитела являются своеобразными иммунохимическими индикаторами, обладающими специфическим родством к гомологичному антигену. Метод флуоресцирующих антител поэтому позволяет производить специфическую идентификацию отдельных микробных клеток. [23]
Метод индикации патогенных микробов при помощи флуоресцирующих антител характеризуется специфичностью, свойственной серологическим реакциям, и высокой чувствительностью люминесцентной микроскопии. Он позволяет идентифицировать отдельные микробные клетки, попадающие в поле зрения люминесцентного микроскопа. Принципиально с помощью метода флуоресцирующих антител можно обнаруживать возбудителей всех известных в настоящее время инфекционных заболеваний, изучать и дифференцировать антигены клеток, тканей, органов животных и растительных организмов. Для этого необходимо располагать соответствующими специфическими иммунофлуоресцентными препаратами. [24]
Методика исследования микроколоний на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии - разработана для ускоренной дифференциации кишечной палочки и холерного вибриона. Однако эта методика не позволяет осуществлять специфическую окраску и дифференциацию патогенных от непатогенных микробов, имеющих одинаковые морфологические и физиологические свойства. Такая дифференциация осуществляется только с помощью метода флуоресцирующих антител. [25]
Это явление обусловлено дальнейшей постепенной диссоциацией комплекса частица целлюлозы флуореоцирующие антитела под воздействием специфического микроба, в результате чего освободившиеся флуоресцирующие антитела соединяются специфическими более прочными связями с гомологичными антигенами микробной клетки, тем самым усиливая ее специфическую флуоресценцию. При микроскопии препаратов заметно, что эти бактерии становятся более крупными из-за наслаивания на их поверхности молекул специфического флуоресцирующего белка. Ободок вокруг клетки становится очень выраженным, он достигает сверхяркой флуоресценции на 5 и б - f -, чего никогда не наблюдается при обработке клеток с помощью прямого и непрямого метода флуоресцирующих антител. [26]
На фиксированный бактериальный мазок накладывают иммунофлуореоцентный диск, на который с помощью пастеровской пипетки наносят каплю физраствора. Препарат помещают во влажную камеру при 37 обычно на 10 - 30 мин. За это время сорбированные на ИД флуоресцирующие иммуноглобулины растворяются в физрастворе и взаимодействуют с гомологичными микробными клетками, находящимися в мазке. Затем препарат вынимают из влажной камеры и промывают в проточной воде или физрастворе в течение 5 - 10 мин для удаления ИД и несвязавшихся флуоресцирующих антител. После подсушивания препарат исследуют под люминесцентным микроскопом. [27]