Cтраница 1
Полный гидролиз белка до аминокислот не может быть осуществлен только одним ферментом; для этого необходимо совместное действие нескольких ферментов. Различают две большие группы ферментов: протеиназы, к которым относятся пепсин, трипсин и химотрипсин, гидролизующие природные белки пищи до больших пептидов, и пепти-дазы, содержащие карбоксипептидазы, аминопептидазы и дипептидазы, гидролизующие пептиды до аминокислот. [1]
Признаком полного гидролиза белка обычно служит отрицательная биуретовая реакция гидролизата. Следует, однако, помнить, что этот признак указывает скорее на приближение окончания гидролиза, чем на его завершение, так как некоторые простые пептиды могут не давать фиолетового окрашивания при биуретовой реакции ( см. стр. Поэтому после констатирования отрицательной биуретовой реакции на белок гидролиз следует продолжать еще 1 - 2 часа и только после этого его можно считать законченным. [2]
После полного гидролиза белка производится количественное определение каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катио-нит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при рН 3; в этих условиях индивидуальные аминокислоты положительно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сулъфополистирольной смоле ( содержащей группы - SOjNa), замещая часть ионов натрия, и удерживаются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элгоция аминокислот при постепенном увеличении рН и ионной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты ( глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. [3]
При полном гидролизе белков образуется смесь приблизительно из двадцати аминокислот. Такие аминокислоты называются а-аминокислотами; их общая формула: NH2 - Clffi - СООН. Исключение составляют пролин и окси-пролии, относящиеся к а-иминокислотам. Эти аминокислоты можно разделить на семь классов: 1) алифатические аминокислоты; 2) оксиаминокислоты; 3) дикарбоновые аминокислоты и их амиды; 4) двухосновные аминокислоты; 5) ароматические аминокислоты; 6) серусодержащие аминокислоты; 7) иминокислоты. [4]
В результате полного гидролиза белка получается сложная смесь различных аминокислот, которые трудно разделить и получить каждую аминокислоту в чистом виде. Поэтому химически чистые аминокислоты, необходимые для проведения научно-исследовательских работ, за небольшими исключениями, являются очень дорогими и трудно доступными веществами. Получение аминокислот путем гидролиза белка оказывается выгодно только в отношении небольшого числа аминокислот, преимущественно содержащихся в каком-либо биологическом субстракте. Так, например, аланин получают при гидролизе шелковых очесов, цистин - при гидролизе шерсти. В последнее время все большее техническое применение получает метод хроматографического разделения смеси аминокислот ( стр. [5]
Главными продуктами полного гидролиза белков являются смеси а-аминокислот, но процесс протекает ступенчато; в определенных условиях, особенно при действии ферментов, белки, расщепляясь, вначале образуют более простые, но близкие к ним по свойствам вещества - пептоны. [6]
Главными продуктами полного гидролиза белков являются смеси а-аминокислот, но процесс протекает ступенчато; в определенных условиях, особенно при действии ферментов, белки, расщепляясь, вначале образуют более простые, но близкие к ним по свойствам вещества - пептоны. Они являются продуктами неполного гидролиза белков и, как оказалось, представляют собой смеси различных по сложности полипептидов ( стр. При дальнейшем гидролизе из пептонов образуются еще более простые полипептиды, дипептиды и, наконец, а-аминокислоты. [7]
В результате полного гидролиза белков получаются смеси аминокислот. Для их выделения, разделения и определения существует ряд методов. [8]
Электродиализный метод разделения продуктов полного гидролиза белков имеет целый ряд существенных преимуществ по сравнению с другими способами, так как он не требует большой затраты времени и труда, дорогостоящих или малодоступных реагентов и, кроме того, дает уверенность, что разделение продуктов гидролиза белка на главные группы произведено с достаточной полнотой. [9]
Вполне возможно, что в случае полного гидролиза белка значительное количество азота, не входящего в состав амидов, также может образовать аммиак. Поэтому рядом исследователей 114 - 16 ] была сделана попытка разработать специальный метод определения азота, входящего в состав амидов. Насколько известно, до настоящего времени еще никому не удалось предложить ультрамикрометод, который мог бы быть использован для этой цели. [10]
Для определения N-концов пептидной цепи получают N-производ-ное концевой аминокислоты пептида, которое идентифицируют после полного гидролиза белка. [11]
Для определения N-концов пептидной цепи получают М - производ-ное концевой аминокислоты пептида, которое идентифицируют после полного гидролиза белка. [12]
При полном гидролизе белков образуются аминокислоты. Очень большой интерес представляет обратная реакция - образование из аминокислот ди -, три и полипептидов. При этой реакции между молекулами аминокислот возникают пептидные связи. [13]
Организм животного ассимилирует только свободные аминокислоты, но не белки или пептиды. При пищеварении происходит полный гидролиз белков до аминокислот. [14]
Учащиеся должны знать, что полный гидролиз белков пищи до аминокислот не может быть осуществлен только одним ферментом, для этого необходимо совместное действие нескольких ферментов желудочного сока - пепсина, трипсина, химотрипсина, гидролизующих природные белки пищи до больших пептидов и затем пептидазов, гидролизующих пептиды до аминокислот. Преподаватель дает определение ферментативному гидролизу белка - процесс превращения белков пищи в аминокислоты, протекающий в желудке. [15]