Cтраница 3
В следующей серии экспериментов с использованием метода ИФА изучали влияние основных компонентов гипорамина в концентрации 1 мкг / мл и 5 мкг / мл на экспрессию вирусных антигенов в клетках MDCK, инфицированных вирусом гриппа А / Япония / 305 / 57 Установлено ( табл. 1), что активные компоненты гипорамина ( казуаринин и казуариктин в смеси) в концентрациях 1 мкг / мл и 5 мкг / мл оказывали на вирусную репродукцию сходный с гипорамином эффект. Добавление смеси, состоящей из казуаринина, стриктинина и изостриктинина, в концентрации 1 мкг / мл оказывало незначительное ингибирующее действие на значение OD 490, однако при увеличении концентрации этой смеси до 5 мкг / мл ингибирующий эффект на значение OD 490 возрастал до 90 % и был сходен с действием гипорамина в этой же концентрации. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что гипорамин и его наиболее активные компоненты ( казуаринин и казуариктин), оказывают одинаковое ингибирующее действие на репродукцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 в клетках MDCK, Добавление менее активных компонентов ( смесь казуаринина со стриктинином и изостриктинином) на вирусную репродукцию снижало эффект, а неактивный компонент ( квебрахит) вообще не подавлял экспрессию вирусных антигенов в инфицированных клетках мышей. [31]
Тбладает более широким спектром высокой противовирусной активности в сочетании с умеренным антибактериальным действием. Гипорамин эффективен при гриппе и других ОРВИ, в том числе осложненных обструктивным синдромом и пневмонией; аденовирусной инфекции; ангинах, протекающих на фоне ОРВЗ; цитомегаловирусной инфекции; простом и рецидивирующем герпесе экстрагенитальной и генитальной локализации; опоясывающем лишае, ветряной оспе. Гипорамин обладает хорошей переносимостью и отсутствием каких-либо побочных явлений у пациентов разных возрастных групп. Гипорамин применяют у взрослых, в том числе беременных женщин, и детей, включая пациентов с 2 - х месячного возраста. [32]
Гипорамин - оригинальный препарат, получаемый из облепихи кру-шиновидной, представляет собой сухой очищенный экстракт на основе полифенольного комплекса галлоэллаготаннинов. Исследования проведены в отношении различных штаммов, в том числе эпидемических, вируса гриппа А и В, аденовирусов, герпеса и ВИЧ-инфекции. [33]
С лечебной целью гипорамин начинали вводить животным через 24 и 48 часов после инфицирования ( когда вирус гриппа уже интенсивно репродуцировался в легких), а затем продолжали ежедневное введение 1 раз в сутки в течение последующих 8 суток. Аэрозольное введение гипорамина проводили в течение 80 мин. [34]
Таким образом проведенные экспериментальные исследования показали, что гипорамин новый отечественный препарат растительного происхождения обладает уникальными биологическими свойствами, сочетая противовирусную активность в отношении широкого спектра патогенных РНК - и ДНК-содержащих вирусов ( гриппа А и Б, герпеса, аденовирусы, ВИЧ и др.), ряда болезнетворных микроорганизмов и обладая при этом интер-ферониндуцирующими свойствами. Учитывая, что гипорамин, как показали исследования, хорошо переносится различными видами клеток ( ФЭК, МДСК, Vero, Нер-2) в дозах во много раз превосходящих терапевтические для каждой модели. Гипорамин обладает высоким ХТИ. [35]
Клиницисты считают, что гипорамин близок по действию к хелепину и алпизарину, несколько уступает ацикловиру, и заметно превосходит бонафтон. [36]
При этом токсического влияния гипорамина в концентрации 250 мкг / мл в отношении культуры клеток Нер-2 выявлено не было. [37]
Первая фаза клинических исследований гипорамина была осуществлена в НИИ вирусологии им. [38]
С использованием метода иммуноферментного анализа показано, что гипорамин ингибирует репродукцию респираторно-синцитиального вируса в культуре клеток, причем его ингибирующий эффект на вирусную репродукцию усиливается с увеличением его концентрации ( 21 8 % - 1 мкг / мл; 73 % - 20 мкг / мл) и уменьшается с увеличением множественности заражения клеток вирусом ( 65 5 % - 0 1 TCD / кл. Сравнительное изучение в системе ИФА гипорамина и виразола показало, что гипорамин ингибировал вирусную репродукцию практически на уровне виразола. Минимальные ингибирующие концентрации 50 ( МИК 50) этих препаратов мало отличаются и равны 5 мкг / мл для виразола и 7 мкг / мл для гипорамина. Установлено также, что ингибирующий эффект на репродукцию респираторно-синцитиального вируса связан с его воздействием на ее ранние этапы. Полученные данные перекликаются с результатами экспериментов по изучению механизма действия гипорамина в отношении вируса гриппа, показавшие, что препарат не действует на вирусную транскрипцию и трансляцию, не обладает эффектом на активность нейраминидазы-поверхностного гликопротеина вируса гриппа, участвующего в расщеплении гликозидной части нейраминовой кислоты с полисахаридной частью клеточного рецептора. С использованием метода ИФА показано, что гипорамин оказывал ингибирующий эффект на репродукцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 только при добавлении его к клеткам до их инфицирования. Совокупность этих данных позволяют связать ингибирующий эффект гипорамина на репродукцию вируса гриппа и респираторно-синцитиального вируса с его воздействием на ее ранние стадии. [39]
Установлено, что при проведении адсорбции вируса в присутствии гипорамина ( варианты 1 и 2) выявлен его значительный вирусингибирующий эффект. При проведении адсорбции в присутствии гипорамина и использовании высокой множественности инфицирования ( в контроле 95 % инфицированных клеток) также выявлен значительный ингибирующий эффект препарата. [40]
Параллельно с изучением интерферониндуцирующей активности гипорамина проводилась индукция стандартными индукторами вирусом болезни Ньюкасла ( ВБН) и стафилококковым эндотоксином типа А ( СЭА), продуцирующими L-интерферон и - интерферон одновременно. Установлено, что гипорамин обладает низкой цитотоксичностью: в дозах 100, 200 500 и 1000 мкг / мл он не оказывал повреждающего действия на монослой М-19. Таким образом, препарат гипорамин, обладая низкой цитотоксичностью, является активным индуктором интерферона в культуре клеток периферической крови человека. [41]
В предварительных опытах было установлено, что гипорамин в концентрациях 30 мкг / мл и ниже не вызывал видимых цитоде-структивных изменений в незараженных клетках фибробластов эмбрионов кур при контакте в течение 7 суток. [42]
Результаты предыдущих опытов по изучению действия гипорамина на накопление вирусспецифических белков дают возможность предположить его влияние на начальный этап вирусной репродукции - адсорбцию, то есть связывание поверхностных белков вируса гриппа с сиалсодержащими остатками клеточных рецепторов. Для проверки этого предположения далее изучено действие гипорамина на адсорбцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 в клетках MDCK. При изучении влияния гипорамина на адсорбцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 на клетках МДСК с помощью ИФА установлено, что добавление гипорамина в различных концентрациях к клеткам за один час до адсорбции оказывало ингиби-рующее действие на экспрессию вирусных белков, выявляемую методом ИФА, увеличивающееся с 45 % при концентрации гипорамина 0 5 мкг / мл до 90 % при его концентрации 10 мкг / мл. [43]
Так, в институте вирусологии была установлена высокая эффективность гипорамина при наблюдении 149 больных, среди которых 84 больных было с неосложненным гриппом и 65 пациентов с другими ОРВЗ, осложненными бактериальной инфекцией - ангиной. Гипорамин при раннем его применении при гриппе и других ОРВЗ ( 1 - 2 день болезни) достоверно сокращал продолжительность лихорадки и симптомов токсикоза. Особенностью гипорамина является его эффективность при ангинах, в том числе протекающих на фоне ОРВЗ: препарат способствует более ранней нормализации температуры, исчезновению симптомов интоксикации и воспалительных изменений в миндалинах. [44]
В соответствии с целью нами были поставлены задачи изучить влияние гипорамина и его компонентов на репродукцию вируса гриппа А в клетках MDCK и его нейраминидазную активность для выявления взаимосвязи их противовирусной активности с воздействием на нейраминидазу. [45]