Гомогенат

Cтраница 1

Содержание белка в залечивающихся дисках из клубня картофеля. [1]

Гомогенат центрифугировался в течение 10 мни. Образовавшийся осадок отбрасывался, а надосадочная жидкость центрифугировалась вторично в течение 30 мин. После часового стояния на холоде осадок митохондриального белка последовательно промывался сначала 50 % - ным, а затем 96 % - ным этиловым спиртом и серным эфиром для удаления ли-пидов. Затем проводился гидролиз в течение 10 мин. [2]

Гомогенат фильтровали через плотную ткань и центрифугировали 5 мин. Осадок суспендировали в растворе II ( сахароза - 0 4М, трис - 0 05М; рН 7 5) и им же промывали митохондрии 10 мин. [3]

Гомогенат фильтровали через один слой фланели с последующим отжиманием и центрифугировали 10 мин. Осадок, состоящий из лейкопластов, ядер, обрывков плазмы, отбрасывали. Надосадочную жидкость центрифугировали 20 мин. [4]

Гомогенат центрифугируют, надосадочную жидкость охлаждают и плотный осадок экстрагируют, повторно гомогенизируя его в 1 объеме холодной дистиллированной воды. Затем к раствору добавляют мелко измельченный порошок сульфата аммония до 0 4 насыщения, после чего добавляют суперсель Хифло ( Hyflo Supercel) и через 30 мин суспензию фильтруют через бумагу. Неактивный осадок отбрасывают, а к фильтрату добавляют сульфат аммония до 0 8 насыщения. После перемешивания в течение нескольких минут суспензию центрифугируют, осадок отбрасывают, а к супернатанту добавляют сухой сульфат аммония до 0 7 насыщения. [5]

Гомогенат фильтровался на воронке Бюхнера через 8 слоев льняного полотна с помощью вакуумного насоса. Осадок хлоропластов отмывается холодным 0 33 М сорбитом, содержащим 0 1 % растворы хлористого натрия и сульфата магния, а затем ресуспендируется в этом же растворе. [6]

Гомогенат, не содержащий клеточных оболочек, подвергают затем дифференциальному центрифугированию для отделения сначала наиболее тяжелого и крупного компонента - ядер. Действительно, ядра можно удалить из гомогената центрифугированием при 100 g или при несколько больших ускорениях. Осадок, содержащий ядра, очищают далее с помощью методов, описанных в гл. [7]

Гомогенат, освобожденный от ядер и хлоропластов, используется далее для выделения митохондрий. Полное осаждение митохондрий достигается центрифугированием при 10 000 g в течение 10 - 20 мин. Полученный таким образом препарат митохондрий загрязнен пропла-стидами. Митохондрии в свою очередь можно очистить с помощью центрифугирования в градиенте плотности; при этом используют менее концентрированные растворы сахарозы и более длительное центрифугирование. [8]

Гомогенат ткани экстрагируют в аппарате Сокслета в течение часа гексаном. Сухой остаток после выпаривания растворителя растворяют в спирте и ведут определение, заканчивающееся фотометрированием в области 490 ммк. [9]

Гомогенат ткани подвергают щелочному гидролизу. Образующийся п-хлора-нилин отгоняют с паром в раствор соляной кислоты. [10]

Гомогенат мышц центрифугируют в течение 10 мин при 600 g и температуре 4 С для удаления обломков клеток и ядер. Надосадочную жидкость ( экстракт мышц) фильтруют через четыре слоя влажной марли. Экстракт содержит гликолитические ферменты, митохондрии и микросомы. [11]

Гомогенат свежесорванных листьев картофеля ( 25 г в 70 мл 0 5 М раствора ацетата натрия, содержащего 0 004 М хлорид магния) наносят на колонку и выдерживают в течение 30 мин для образования слоя хлоропластов. Затем слой хлоропластов перемешивают с песком так, чтобы скорость элюирования составляла 2 мл / мин. Первые порции элюата, имеющего коричневую окраску, анализируют колориметрически. Далее промывают колонку 250 мл исходного буферного раствора и 150 мл модифицированного буфера, отличающегося от исходного отсутствием полиэтиленгликоля или хлорида натрия. К элюату добавляют полизтиленгликоль и хлорид натрия до нужной концентрации и обе порции фильтруют через вторую колонку, аналогичную первой. При этом вирус вновь сорбируется на целлюлозе. [12]

В гомогенат, в котором происходит синтез протояорфирнна, введен меченный 14С глицин. [13]

Навеску гомогената экстрагируют избытком гексана. [14]

Дистиллат гомогената извлекают гептаном или изоокта-ном, концентрируют экстракты и хроматографируют на бумаге. При освещении хроматограммы ультрафиолетовым светом обнаруживается характерная люминесценция, по которой можно вести качественный анализ. [15]

Страницы: 1 2 3 4