Cтраница 2
Перемешивание гомогената продолжают в течение часа с помощью механической мешалки. Суперна-тант фильтруют через стеклянную вату. [16]
Центрифугацией гомогената были отделены протеины и РНК. [17]
К анализируемому гомогенату жировой ткани ( образец 1 г) в коническую колбу ( объемом 300 мл) с обратным холодильником добавляют 15 мл этилового спирта и 3 мл раствора едкого кали. Кипятят в течение часа, охлаждают, доливают 10 мл дистиллированной воды и 50 мл гексана. После интенсивного взбалтывания позволяют фазам разделиться; повторяют эту операцию трижды и нижнюю фазу отбрасывают. Экстракт промывают 50 мл раствора соляной кислоты, 25 мл дистиллированной воды и 25 мл раствора хлористого натрия. Водную фазу каждый раз сливают. [18]
К анализируемому гомогенату жировой ткани ( образец 1 г) в коническую колбу ( объемом 300 мл) с обратным холодильником добавляют 15 мл этилового спирта и 3 мл раствора едкого кали. Кипятят в течение часа, охлаждают, доливают 10 мл дистиллированной воды и 50 мл гексана. После интенсивного взбалтывания позволяют фазам разделиться; повторяют эту операцию трижды и нижнюю фазу отбрасывают. Экстракт промывают 50 мл раствора соляной кислоты, 25 мл дистиллированной воды и 25 мл раствора хлористого натрия. Водную фазу каждый раз сливают. Затем просушивают экстракт сернокислым натрием, переносят в пробирку и концентрируют до 5 мл на водяной бане при 40 с помощью тока воздуха. [19]
![]() |
Слои, образующиеся при фенольной обработке гомогената. 1 - водносолевой, 2 - промежуточный ( белковый, 3 - фенолышй, 4 - осадок. [20] |
При обработке гомогената фенолом с применением ПАСК и ДДС достигается извлечение 95 - 98 % ДНК и 85 - 90 % РНК - Для полного извлечения прочно связанной РНК применяется го-рячефенольная обработка. [21]
Материал исследования: гомогенат или ацетоновый порошок печени животных. [22]
Например, в гомогенат, из которого нужно выделить ядра, добавляют меченые рибосомы. Затем ядра выделяют, а степень загрязнения ядерной фракции рибосомами оценивают по величине радиоактивности. Наличие загрязнения во фракции, которую считали чистой - это опасность, постоянно подстерегающая биохимика. [23]
Затем поверх градиента наслаивают гомогенат и проводят центрифугирование при больших скоростях в роторе с откидывающимися в горизонтальное положение стаканами. Хлоропласты же остаются взвешенными в слое 1 3 М сахарозы. Хотя плотности и скорости осаждения хлоропластов несколько варьируют в зависимости от вида растения, все же в большинстве случаев такое центрифугирование в градиенте плотности сахарозы позволяет полно разделить ядра и хлоропласты ( фиг. [24]
Если фракционировались разные количества активированного панкреатического гомогената на модифицированном препарате ингибитор ( Worthington) - сефароза, полученном при рН 7 2, то увеличение нагрузки колонки приводило к тому, что пики с химотриптической активностью элюировались при более высоких значениях рН ( табл. 10.3) и хуже разделялись. [25]
Прирост малонового диальдегида за время инкубации гомогената ткани отражает скорость перекисного окисления тканевых липи-дов. [26]
Были поставлены также контрольные пробы с гомогенатом кожи, но без прибавления ФОС. Эти опыты показали, что сам гомогенат кожи может давать определенное количество кислоты, но оно сравнительно невелико и заметно не изменяет рН среды. Это количество кислоты может быть оттитровано и затем учтено при подсчетах образовавшейся кислоты из действующих веществ. [27]
![]() |
Кривые спонтанного гидролиза ( / и гидролиза в присутствии гомогената кожи крысы ( 2 препарата М-81.| Кривые спонтанного гидролиза ( 7 и гидролиза в присутствии гомогената кожи ( 2 фосфамида. [28] |
Необходимо отметить, что скорость гидролиза гомогенатом кожи большинства веществ увеличивается примерно одинаково - в 2 3 - 5 4 раза. Исключение составляют лишь окисленные производные препарата М-77, ферментативный гидролиз которых ускорен, по сравнению со спонтанным более, чем в 10 раз. Это указывает, по-видимому, на то, что активность ферментов кожных тканей, ускоряющих гидролиз фосфорорганических веществ, не одинакова по отношению к различным представителям этого класса соединений. [29]
Гомогенизируют 10 г исследуемого образца, подкисляют гомогенат 1 мл раствора серной кислоты, растирают с инфузорной землей или битым стеклом и экстрагируют бензолом в приборе Сокслета в течение 4 час. Концентрируют экстракт до 25 мл, испаряя часть бензола током воздуха, при необходимости фильтруют и производят хромато-графическую очистку. [30]