Cтраница 3
Необходимо отметить, что специальных исследований, дают ли ацетоновый препарат печени, срезы и гомогенаты один и тот же продукт, не производилось. [31]
Одним из доказательств, полученных в подтверждение данной схемы, является тот факт, что гомогенаты белого донника катализируют гидролиз кумаринилглюкозида значительно быстрее, чем гидролиз транс-глюкозида. При последующей очистке этого фермента ( 46 раз) из донника белого получен препарат, который на цыс-глюкозид действует примерно в 100 раз быстрее, чем на транс-глюкозид. Глюкозиды других соединений [ салициловая кислота, салициловый альдегид и мелилотовая кислота ( о-оксифенилпропионовая кислота) ] гидролизуются примерно в два раза медленнее, чем глюкозид кумарина. Все эти соединения - о-фенолы, однако не все испытанные глюкозиды о-фено-лов могут служить в качестве субстратов. [32]
Рядом исследователей было обнаружено, что меченые аминокислоты могут включаться также и в белки срезов органов или гомогенатов. Так, например, изотопная сера S35, входящая в состав цистина или метионина, быстро обнаруживается в белках срезов печени. Неизвестно, однако, происходит ли в этих случаях истинный синтез белка, так как большую часть меченых аминокислот можно отщепить при помощи восстанавливающих агентов. [33]
Обычно для экстрагирования исходных соединений и негидро-лизованных метаболитов из образцов, содержащих жиры ( например, молоко или гомогенаты всего животного), целесообразно растворить жир и ФОС в гексане, а затем извлечь ФОС повторным экстрагированием ацетонитрилом. Этот способ использован группой Ка-сида для паратиона [1], диметоата [28] и кораля [60] и особенно эффективен в тех случаях, когда извлекаемое ФОС обладает некоторой полярностью. [34]
Одним из наиболее ранних биохимических сдвигов, описанных при дефиците селена и витамина Е у крыс, была неспособность гомогенатов и срезов печени поддерживать нормальный уровень дыхания после длительной инкубации in vitro. Селен оказался прекрасным катализатором восстановления цитохрома с тиола-мн, н в мышцах овец был описан селенопротеид, содержащий гем, близкий по своей структуре к цитохрому с. Все же для выяснения роли селена в дыхательной цепи митохондрий необходимо проведение дополнительных исследований. [35]
Запасные белки локализованы в определенных субклеточных структурах ( фото 51) - белковых телах, которые можно выделить из клеточных гомогенатов [77] и которые, вероятно, содержат только глобулины. [36]
Скорость распада белка во всех исследованных органах при различных формах белкового дефицита - на фоне гиповитаминоза А, как об этом свидетельствуют данные изучения гомогенатов, была выше, чем в контроле. Сдвиги при этом оказались в основном более выраженными по сравнению с таковыми при недостаточности отдельных компонентов, о которых уже было сказано. [37]
Однако полученные при этом отрицательные результаты указывали на то, что ГМК не реагирует с меркапто-уксусной кислотой, цистеином и глутатионом даже в присутствии гомогенатов из листьев редиса. Противоречат этой гипотезе также современные представления о строении молекулы ГМК, которая, согласно спектрографическим исследованиям, существует в оксипиридазоновой форме, не имеющей активированной кратной связи. [38]
Катехинамины встречаются в клетках в водорастворимой форме - в виде гранул диаметром 50 - 150 ммк, которые можно отделить от других субклеточных частиц тканевых гомогенатов дифференциальным центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Фенолоамины можно выделить из гранул физическими и химическими методами. В этих гранулах также находятся в больших концентрациях аденозиннуклеотиды ( в основном АТФ), белки и липиды. Как у позвоночных, так и у беспозвоночных фенолы индольного ряда связаны главным образом с центральной и, возможно, с периферической нервной системой. ОТ найден в особом веществе мозга, в больших количествах он содержится в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, а также в тромбоцитах. Доказано, что в тромбоцитах он связан с аденозин-нуклеотидами, подобному тому как катехинамины связаны с АТФ. [39]
К 0 4 мл раствора дрожжевой РНК в центрифужную пробирку вносят 0 2 мл раствора РНКазы ( в качестве источника фермента можно использовать 5 % водные гомогенаты тканей объемом 0 5 мл, а также разбавленную в 10 раз слюну), перемешивают и помещают в термостат на 30 - 60 мин при 37 С. В пробирку вносят 1 мл спирто-магние-вого осадителя и помещают на ледяную баню. Через 1 ч образуется осадок РНК, который удаляют центрифугированием при 8000 об / мин в течение 20 мин. Затем отбирают 2 - 3 пробы надосадочной жидкости ( 0 5 мл), прибавляют к каждой по 3 мл дистиллированной воды, перемешивают и измеряют оптическую плотность раствора при 260 нм против воды. [40]
Можно надеяться, что в ходе этих исследований, помимо разработки способов классификации важных видов животных, будут созданы простые биохимические тееты, выполняемые In vitro ( такие, как, например, окислительная, восстановительная и гидролитическая активность гомогенатов), с помощью которых можно будет быстро оценить свойства новых членистоногих, которые в будущем могут приобрести экономическое значение как сельскохозяйственные вредители. Но мы не должны ограничивать наше рассмотрение вредителями, принадлежащими к типу членистоногих. Есть все основания глубже заняться избирательным действием на различные виды млекопитающих; создание безопасных ФОС для уничтожения грызунов находится сейчас в пределах наших возможностей. [41]
В одном отношении имеющиеся данные требовали изменения гипотезы, поскольку ацетион, как оказалось, обладает очень низкой токсичностью по отношению к американскому таракану: LD50 составляла 1000 мкг / г. Однако в этом случае была обнаружена хорошая корреляция между токсичностью и метаболизмом in vitro - ацетион быстро разрушался в присутствии срезов печени мышей и под действием гомогенатов тараканов; в то же время разрушения совершенно не происходило под влиянием гомогенатов комнатных мух. [42]
Лелуар и Кардини синтезировали глюкозамин-6 - фосфат из глю-козо-6 - фосфата и глютамина с помощью ферментов, выделенных из Neurospora Grassa [8], Лоутер и Рокере [9] - из глюкозы, аденозинтрифосфорной кислоты ( АТФ) и глютамина экстрактами стрептококка, Покель и Грайдер [10] - из глюкозо-6 - фосфата и глютамина ферментом из печени крыс, Паронетто [11] в качестве ферментных систем использовал гомогенаты слизистой желудка, аорты, печени, мозга, легких, крови, тестикул крыс и хряща кроликов. [43]
В одном отношении имеющиеся данные требовали изменения гипотезы, поскольку ацетион, как оказалось, обладает очень низкой токсичностью по отношению к американскому таракану: LD50 составляла 1000 мкг / г. Однако в этом случае была обнаружена хорошая корреляция между токсичностью и метаболизмом in vitro - ацетион быстро разрушался в присутствии срезов печени мышей и под действием гомогенатов тараканов; в то же время разрушения совершенно не происходило под влиянием гомогенатов комнатных мух. [44]
В работе [65] было показано, что изометрическое напряжение в глицеринизированных мышечных волокнах в отсутствие ионов Са и Mg сильно возрастает с концентрацией АТФ. АТФ-аз-иая активность соответствующих гомогенатов, напротив, сначала возрастает, а затем падает вновь. Таким образом, эти два процесса не параллельны. Авторы работы [65] приходят к выводу, что выделение свободной энергии при расщеплении АТФ не необходимо для укорочения или развития напряжения. Предполагается, что в процессе мышечного сокращения происходят изменения упорядоченности белков ( см. ниже стр. [45]