Cтраница 1
Гомогенаты печени и автолизаты дрожжей образуют из мевалоновой кислоты сквален. Эти две ферментные системы были использованы для того, чтобы выяснить промежуточные этапы биосинтеза сквалена. Потребность в АТФ позволяет предполагать, что должны существовать фосфорилированные промежуточные продукты. Показано, что первым промежуточным продуктом этих превращений является 5-фосфомевалоновая кислота ( фиг. Если для синтеза сквалена в качестве субстрата употребляют 5-фосфомевалоно-вую кислоту, то потребность в АТФ сохраняется. Это привело к выявлению еще одной киназы и к выделению 5-дифосфомевалоно-вой кислоты. [1]
Гомогенаты печени ( 20 %) готовили на 0 9 % - ном растворе KCI. Большинство фенольных соединений, а также L-пролин и L-окси-пролин растворяли в Рингер-бикарбонатном буфере ( рЦ 7 4)), ка-техинъг и АК растворяли в воде. Плохо раствор амые соединения приготовляли в виде суспензии. [2]
При обработке гомогенатов печени водонасыщенным фенолом РНК переходит в водную фазу. Выход повышается в присутствии до-децилсульфата натрия, который является также ингибитором рибонук-леаз. Для предотвращения экстракции ДНК обработку фенолом рекомендуется проводить при рН 6 0 и 60 С. [3]
В опытах in vitro с использованием гомогенатов печени собак или ее постмитохондриальной фракции происходит только дез-метилирование хлордиазепоксида. [4]
В дальнейшем с применением манометрического и колориметрического анализа показано, что гомогенаты печени гидролизуют малатион и что этот гидролиз тормозится той же группой ФОС. Авторы предварительно назвали гидролизующий фермент малатионазой до тех пор, пока не станет известным нормальный субстрат его действия. [5]
Мы показали, что хлороформ также можно использовать при экстракции из плазмы крови, гомогенатов печени и мозга диазепама, хлордиазепоксида, медазепама [258], нитразепама [235], других замещенных в положении 7 1 4-бенздиазепинов [269, 270] и их метаболитов. Сравнительным анализом экстракции оксазепама из плазмы крови, спинно-мозговой жидкости и мочи хлороформом, дихлорэтаном и хлористым метиленом установлено [271], что во всех случаях извлекается примерно 80 % препарата. Тем не менее для дальнейших работ был использован хлористый метилен, так как он быстрее других расслаивается в водной среде. [6]
Синтез эфиров пептида метионина из изопропилового эфира метионина под действием кристаллического химотрипсина [ 514а ] или гомогенатов печени [5146] является аналогичным процессом, повидимому, связанным с эстераз-ной активностью используемого фермента. [7]
Как видно, через 2 ч после введения радиометки у животных с дисбалансом в питании наблюдалось повышение удельной радиоактивности белков гомогенатов печени и почек, причем более интенсивное в группе, содержавшейся на диете с дефицитом белка на фоне гиповитаминоза А. В го же время в вилочковой железе и селезенке скорость биосинтеза протеина закономерно снижалась. В сердечной мышце при различных формах: белковой недостаточности в сочетании с дефицитом ретинола так же, как и при изолированном гиповитаминозе А, заметных изменений не обнаружено. [8]
Основа наших знаний о синтезе сульфатов была заложена Де Мейо и его сотрудниками ( например, [14, 15]), которые показали, что арилсульфаты могут синтезироваться при участии ферментов в растворимой фракции гомогенатов печени крысы из фенолов и сульфат-ионов в присутствии АТФ и ионов магния. Далее было показано [16], что ферментную систему можно разделить на две фракции: одна активирует сульфат, а другая переносит этот активированный сульфат на фенол. [9]
Мерфи и Дю Буа [69] изучили активирование тионфосфата гутиона в зависимости от возраста и пола животных. В этих опытах были использованы нефракционированные гомогенаты печени с добавлением никотинамида и ДПН. [10]
Это соединение является мощным антихолинэстеразным ядом, не нуждающимся в активировании. Оно быстро разрушается под действием гомогенатов печени, причем практически вся каталитическая активность сосредоточена в микросомах. Для осуществления реакции необходимо присутствие кислорода, фосфата и ДПН. Это последнее вещество можно не добавлять, если реакция проводится в среде, содержащейникотинамид. [11]
Источниками расщепляющих ферментов обычно служили срезы или гомогенаты печени. [12]
Дейви-сон [29] нашел, что активирующая способность гомогенатов печени крысы может быть восстановлена путем добавления магния и ДПН ( дифосфопиридиннуклеотида) вместе с никотинамидом точно так же, как это наблюдалось при активировании шрадана. Активность обработанных таким образом гомогенатов была сосредоточена только во фракции микросом и надосадочной жидкости. [13]
В конце этого периода изучали включение глицина-1 - 14С в белки гомогенатов печени, почек, сердечной и скелетной мышц, вилочковой железы, селезенки и субклеточных фракций ( ядра, митохондрии, микросомы, постмикросомальный супернатант) печени и почек. Меченую аминокислоту вводили крысам внутрибрю-шинно из расчета 0 5 мкКи на 1 г массы тела за 2 и 96 ч до забоя, и по включению радиометки в белки в указанные сроки судили соответственно о скорости биосинтеза и распада белка. [14]
Морские свинки первой группы ( контрольные) получали только диету; второй группы-1 мг АК ежедневно с начала опыта; третьей - 1 мг АК и 10 мг катехинов; четвертой - 1 мк АК и 10 мг кверцетина; животных пятой-седьмой групп с начала опытного периода в течение 18 - 20 дней выдерживали на одной диете без витаминов С и Р и только после появления признаков цинги ( падение веса, опухшие суставы) им назначали витамины С и Р: свинкам пятой группы - 1 г АК, шестой - 1 мг АК и 10 мг катехинов, седьмой - 1 мг АК и 10 MS кверцетина ежедневно в течение примерно четырех недель, Восьмая группа животных была оставлена на рационе вивария. По окончании опытного периода ( 45 - 50 дней) морских свинок забивали декапитацией и определяли способность их печени окислять добавленные в гомогенаты печени L-пролин или L-оксипролин. Интенсивность окисления пролина и оксипролина выражали в процентах окисленных субстратов по отношению к добавленным в пробу. [15]