Градиент - плотность - сахароза
Cтраница 1
Градиент плотности сахарозы равен примерно 1 3 мг / см3 / мм. Поскольку обратный градиент плотности раствора РНК не должен превышать 1 3 мг / см3 / мм, то верхний предел этого градиента должен составлять 1 0 мг / см3 / мм. [1]
Выражение градиент плотности сахарозы, часто встречающееся в литературе, является точным, но длинным. Название сахарозный градиент означает градиент концентрации сахарозы, а это в сущности и есть градиент плотности раствора. [2]
 |
Идентификация кДНК - клонов, кодирующих эукариотические целлюлазы, с помощью дифференциальной гибридизации. [3] |
Каждую популяцию мРНК фракционируют в градиенте плотности сахарозы. Проводят трансляцию мРНК каждой фракции в бесклеточной системе на основе ретикулоци-тов кролика или зародышей пшеницы. [4]
Фракционирование белков, нуклеиновых кислот и других макромолекул при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы основано на различии в скорости седиментации молекул, пропорциональной их молекулярной массе. Фракции РНК, обладающие различной молекулярной массой, после центрифугирования распределяются в линейном градиенте концентрации сахарозы; при этом благодаря значительной вязкости растворов сахарозы улучшается разделение и уменьшается возможность смешивания различных фракций. [5]
 |
Выделение и фракционирование плазмид, одна из которых несет ген протоксина. [6] |
Чтобы определить, в какой именно, проводили центрифугирование плазмидной ДНК в градиенте плотности сахарозы. [7]
Для того чтобы отделить рибосомы от полисом, был использован метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Этот метод позволяет разделять материалы, осаждающиеся с разными скоростями в сильном гравитационном поле, и заключается в следующем. Пластмассовую центрифужную пробирку наполняют раствором сахара, концентрация которого плавно меняется, например от 30 % на дне пробирки до 15 % в верхнем слое. Для получения градиента медленно наполняют пробирку из двух сосудов, содержащих 15-процентный и 30-процентный раствор сахарозы. По мере наполнения количество приливаемого 30-процентного раствора убавляют, а 15-процентного - прибавляют. Испытуемый материал, состоящий из молекул различной величины, осторожно наслаивается поверх раствора сахара, после чего пробирку помещают в ротор центрифуги. Сахарозный градиент сохраняется во время центрифугирования и после него за счет силы тяжести. Во время центрифугирования молекулы разного размера проходят неодинаковое расстояние и остаются разделенными и после центрифугирования. [8]
Интересное исследование описано Коппелем [49], который разделил рибосомы в аналитической центрифуге при наличии градиента плотности сахарозы и определил значения D, непосредственно внутри этого градиента для отдельных фракций. [9]
То, что именно полисомы участвуют в белковом синтезе, может быть показано методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Для этой цели клетки в течение короткого промежутка времени обрабатывают меченой аминокислотой, после чего из этих клеток выделяют рибосомы. [10]
Хотя в настоящее время существуют методы определения изоэлектрической точки исследуемых белков с достаточной точностью ( например, изоэлектрическое фокусирование в градиенте плотности сахарозы), знание изоточки вовсе не обязательно для выбора ионообменника. Пригодность того или иного ионита легко определить по степени связывания белка в статических условиях. В случае анионита смолу приводят в равновесие с буферным раствором, рН которого соответствует верхней границе области устойчивости исследуемого белка. [11]
Катехинамины встречаются в клетках в водорастворимой форме - в виде гранул диаметром 50 - 150 ммк, которые можно отделить от других субклеточных частиц тканевых гомогенатов дифференциальным центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Фенолоамины можно выделить из гранул физическими и химическими методами. В этих гранулах также находятся в больших концентрациях аденозиннуклеотиды ( в основном АТФ), белки и липиды. Как у позвоночных, так и у беспозвоночных фенолы индольного ряда связаны главным образом с центральной и, возможно, с периферической нервной системой. ОТ найден в особом веществе мозга, в больших количествах он содержится в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, а также в тромбоцитах. Доказано, что в тромбоцитах он связан с аденозин-нуклеотидами, подобному тому как катехинамины связаны с АТФ. [12]
Технология получения гемагтлютинина из гриппозных вирио-нов заключается в следующем: накопленный вирусный материал в аллантоисной жидкости куриного эмбриона сепарируют, подвергают микрофильтрации и фильтрационному концентрированию примерно в 50 раз, при необходимости дополнительно очищают ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы; концентрированный вирионный материал обрабатывают катионным ПАВ и отделяют гемагтлютинины ультрафильтрацией с последующими диализом и стерилизующей фильтрацией. [13]
 |
Хроматография орнитин-карбамоилтрансферазы на геле фосфата 1 кальция. [14] |
Гель-фильтрацию проводят на сефадексе G-200 в указанном рабочем растворе, что дает двукратное увеличение удельной активности. Ультрацентрифугирование проводят в градиенте плотности сахарозы ( 30 мл 25 % - ного раствора NaCl 0 1 M орнитин; 30 - 10 % - ная сахароза), внося в каждую пробирку 1 мл фрак-циих полученной после дробного осаждения ацетоном. После центрифугирования ( Beckman, угловой ротор типа 60 Ti; 5 C; 60000 об / мин; 6 - 12 ч) собирают фракции ( объемом 7 мл) и объединяют фракции, содержащие активный фермент. Эта стадия дает двукратное увеличение активности. [15]
Страницы: 1 2