Cтраница 2
В настоящее время ограниченность экспериментальных данных не позволяет всесторонне оценить преимущества этой защитной группировки. Метоксибензило-вые эфиры обычно расщепляются каталитическим гидрогенолизом или кислотным гидролизом в очень мягких условиях. Это значит, что среди N-защитных группировок в присутствии л-метоксибензиловых эфиров может селективно отщепляться лишь трифторацетильная группа. [16]
Циклический фрагмент соединения 16 отвечает структуре соединения 2-гидрокси - 2-трифторметил - 1 3-диоксолана, или 2 / 3-ортоэфира трифторуксусной кислоты. Очевидно, в случае трифторацетата такое взаимодействие усиливается вследствие увеличения положительного заряда на карбонильном углероде. В интермеди-ате 18, вероятно, происходит миграция СРзСО-группы на ОН ( 25) - гидроксил с последующей нуклеофильной атакой ОН ( 22) на С ( 25) - атом, индуцированный трифторацетильной группой в интермедиате 20, в результате чего образуется тетрагидрофурано-вый цикл. [17]
Перед трифторацетилированием SH-группы исследуемого белка карбоксиметилируют или окисляют надмуравьиной кислотой. После внесения последней порции этилтиотрифторацетата рН понижают до 6 и удаляют мочевину и избыток реагента, диализуя смесь против дистиллированной воды или 1 % - ного раствора бикарбоната аммония. В результате трифтораце-тилирования е-аминогруппы остатков лизина блокируются трифто-рацетильными группами, и поэтому они не могут быть протониро-ваны. Далее модифицированный белок подвергают ферментативному гидролизу, следя за тем, чтобы рН не превысил 8 2, так как в более щелочной среде трифторацетильные группы отщепляются. [18]
Защита карбоксильной группы путем ее перевода в соответствующий сложный эфир, рассмотренная в предыдущем разделе, в известном смысле способствует активации карбоксильной функции. В связи с этим для предотвращения побочных реакций используемые для синтеза гидрази-дов производные гидразина предварительно блокируют подходящей N-защитной группой. Такой прием позволяет легко осуществить переход к соответствующему гидразиду и, кроме того, делает возможным дальнейшее использование азидного метода, например в случае высших пептидов, чрезвычайно лабильных к гидразинолизу. Замещенные гидразиды целесообразно применять также в комбинации с фталильной группой, крайне чувствительной к гидразинолизу, и трифторацетильной группой, отщепляющейся при действии гидразина, что объясняется его сильно основными свойствами. Наличие гуанидиновых группировок в пептидах, содержащих остатки аргинина [890] или нитро-аргинина [292], является причиной побочных реакций во время гидразинолиза; в этом случае применение азидного метода также возможно лишь при использовании защищенных гидразидов. Необходимость введения дополнительной N-защитной группы является недостатком рассматриваемого метода. При выборе этой группы следует иметь в виду возможность селективного удаления любой другой защитной группировки, присутствующей в данном пептиде. [19]