Cтраница 4
То, что после тепловой денатурации ДНК является однотяжной, было показано также несколько иным методом. В случае РНК из опухоли Леттрэ - Эрлиха наклон кривой ( 0 86) указывал на наличие однотяжной структуры; в случае ДНК в течение первых 30 мин наклон кривой был 1 1, а затем уменьшался, но двухцепочечной структуры при 95 для ДНК вообще не было обнаружено. Следует заметить, что изучение кинетики ферментативного гидролиза ДНК, денатурированной нагреванием, может привести к ошибочным выводам. Действительно, двухспиральные структуры, которые заново образуются при охлаждении ( либо из одной и той же, либо из различных цепей), могут оказаться достаточно устойчивыми, и кинетика их гидролиза будет сходна с кинетикой гидролиза двухцепочечной ДНК дезоксирибонуклеазой. [46]
Нуклеиновые кислоты представляют собой полинуклео-тиды, в которых отдельные нуклеотиды связаны фосфодиэфир-ными мостиками, образующимися в результате этерификации гидроксильной группы при С3 одного полинуклеотида остатком фосфорной кислоты при С5 другого нуклеотида. Фосфо-диэфирная связь характерна и для РНК, и для ДНК, так как в ее образовании не участвует атом С2, замещение которого отличает РНК и ДНК друг от друга. Доказательства наличия фосфодиэфирных мостиков получены при изучении результатов ферментативного гидролиза нуклеиновых кислот. Последовательный гидролиз нуклеиновых кислот панкреатической дез-оксирибонуклеазой и фосфодиэстеразой змеиного яда приводит к образованию нуклеозид-5 - фосфатов. При гидролизе панкреатической дезоксирибонуклеазой в комбинации с фос-фодиэстеразой селезенки получаются нуклеозид - З - фосфаты. Изображение структуры нуклеиновых кислот привычными структурными формулами ( формула а на приводимой далее схеме) оказывается слишком громоздким, поэтому для описания последовательностей нуклеиновых кислот можно использовать более краткие записи. [47]
Нуклео-тидный состав ДНК, выделенной из этого фага фенольной экстракцией, не характерен для нуклеиновых кислот, состоящих из двух комплементарных цепей; эта ДНК осаждалась ионами свинца и реагировала с формальдегидом, что указывало на отсутствие структуры, связанной прочными водородными связями, в образовании которых принимают участие 6-аминогруппы пуриновых и пиримидиновых оснований. Исследования методом светорассеяния показали, что ДНК из бактериофага Х-174 является исключительно гибкой и ее конформация сильно зависит от ионной силы раствора. Было найдено, что в 0 02 М растворе хлористого натрия при 37 радиус инерции молекулы составляет 1140 А, а в 0 2 М растворе хлористого натрия он уменьшается до 440 А. Ионы магния при такой концентрации значительно более эффективны. При гидролизе полимера панкреатической дезоксирибонуклеазой средний молекулярный вес ДНК уменьшается в такой зависимости, которую можно было ожидать для одноцепочечной молекулы. [48]