Дезоксирибонуклеопротеид
Cтраница 2
Во-первых, совершенно естественно, что, когда мы получили данные о том, что величина оптической активности дезоксирибонуклеопротеидов ( даже если рассчитывать только на концентрацию ДНК, входящей в комплекс) значительно ниже, чем тот же параметр для ДНК, возник вопрос об аддитивности. Исследование оптической активности отдельно суммарного ги-стона не спасает положения, так как элементарные расчеты, предпосылкой которых является аддитивность, указывают на то, что аддитивности нет. Однако исследование активности гиетонов само по себе не является строгим, поскольку нет полной уверенности в том, что обычные методы выделения гистонов не приводят к изменению вращения этого белка. Чтобы исключить это обстоятельство, А. И. Горин в нашей лаборатории исследовал оптическую активность фракций ДНП, полученных ступенчатой депротеинизацией, в которых прогрессивно уменьшалось количество белка. И в этом случае экстраполяция величины оптического вращения в зависимости от количества белка в ДНП на нулевую концентрацию белка приводит к значениям этого параметра примерно на 50 % ниже, чем это характерно для нативной ДНК. [16]
Для другой области клинических исследований представляет интерес сообщение Зальцера и Балиса [62] об аминокислотах, которые входят в состав дезоксирибонуклеопротеидов ( ДНП) опухолей. Установлено, что ДНП опухолей содержат меньше основных аминокислот, чем ДНП нормальных тканей, и что в некоторых небольших опухолях присутствует также вещество, хроматографически подобное ароматическим аминокислотам. [17]
Отделение дезоксирибонуклеиновой кислоты от белковой части нуклеопротеида проводят таким же способом, как и отделение рибонуклеиновой кислоты, только с той разницей, что препарат дезоксирибонуклеопротеида гидролизуют не при нулевой температуре, а в кипящей бане. [18]
Дезоксирибонуклеопротеид с дифениламином при нагревании дает синее окрашивание в результате гидролиза и освобождения дезоксирибозы, которая и реагирует с дифениламином. Рибоза с дифениламином образует продукты реакции, окрашенные Е зеленый цвет. [19]
При этом удаляется только РНК, а гистоны остаются. В этих условиях дезоксирибонуклеопротеиды диссоциируют. При более высоком рН реакцией Фелыена не выявляется часть ДНК, связанная с сильно основными белками типа протаминов и - аргининовых гистонов. [20]
 |
Центрифужные весы. [21] |
При нагревании раствора дезоксирибонуклеопротеида с дифе-нилам иновым реактивом жидкость постепенно приобретает синее окрашивание. Реакция обусловлена гидролизом дезоксирибонуклеопротеида и освобождением дезоксир ибозы, которая и дает с дифениламином синее окрашивание. При взаимодействии с дифениламином рибозы рибонуклеиновой кислоты образуются продукты реакции, окрашенные в зеленый цвет. [22]
В природе ДНК находится в клеточном ядре в виде дезоксири-бонуклеопротеида. Для выделения ДНК необходимо сначала экстрагировать дезоксирибонуклеопротеид и затем отделить ДНК от связанного с ней белка. При встряхивании вязкого раствора с хлороформом, содержащим немного октилового или амилового спирта [3], белок образует гель на поверхности раздела хлороформ - вода, тогда как натриевая соль нуклеиновой кислоты остается в водной фазе. Однако обычно ДНК выделяют при помощи фенола. [23]
В настоящее время известно, что существуют вещества, содержащиеся в хромосомах клеточных ядер, ответственные за генетический контроль в растениях и животных. Химический анализ хромосом показал, что они состоят из гигантских молекул дезоксирибонуклеопротеидов, которые представляют собой дезоксирибонуклеиновые кислоты ( ДНК), связанные с белком. Установлено, что генетическую информацию при биосинтезе ферментов и других белков несет не белковая компонента нуклеопротеида, а ДНК; поэтому в настоящем разделе основное внимание будет уделено ДНК и прежде всего ее структуре. Заметим, что участки ДНК представляют собой химический эквивалент генов Менделя - единиц наследственности. [24]
При осаждении из солевых растворов ядерные нуклеопротеиды выпадают в виде нитей. Фосфористые белки, описа-нные еще в прошлом веке А. Я. Данилевским, являются в основном дезоксирибонуклеопротеидами. Ядерные нуклеопротеиды составляют также главную часть так называемых струк урных белков различных тканей. [25]
В растущих вегетативных органах растений ИУК главным образом связывается с протеидами - рибо - и дезоксирибонуклеопротеидами. При количественном определении связанной ИУК с нуклеопротеидами в начале необходимо получить препараты рибонуклеопротеидов и дезок-сирибонуклеопротеидов. [26]
Итак, попытки понять механизм разлома многонитчатых хромосом существуют. Ясно, что должны быть механизмы, которые при минимуме поглощенной энергии обеспечивают разрыв пучка нитей дезоксирибонуклеопротеида, и следует упорно вести поиски в этом направлении. [27]
Одним из фактов, затрудняющих выявление изменений в нуклеиновых кислотах тотчас после облучения, по нашему мнению, является некоторое несоответствие методов исследования исследуемому объекту. А именно: либо авторы уже в процессе выделения ДНК выделяли ее не всю, а только определенную ее фракцию ( это имеет место при выделении ДНК через промежуточное получение дезоксирибонуклеопротеида), либо, выделяя все фракции ДНК, авторы затем не фракционировали ее, а исследовали средние свойства всех фракций. [28]
Затем растертую массу центрифугируют в течение 10 - 15 мин. Центри-фугат переносят в стакан емкостью 100 - 150мл и медленно, при помешивании стеклянной палочкой, добавляют 80 - 90 мл дистиллированной воды. Нерастворимый в воде Дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и при помешивании стеклянной палочкой наматывается на нее в виде нитей. Палочку вместе с нитями осторожно вынимают и переносят в чистую пробирку, в которой Дезоксирибонуклеопротеид растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % - ного раствора NaOH. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифениламинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 5 - 10 мин. Смесь постепенно становится синей. [29]
Твердый остаток, оставшийся после экстрагирования рибонуклеопротеидов, используют для получения дезоксирибонуклеопроте-идов. Его заливают охлажденным раствором 1 М NaCl и при частом взбалтывании на холоде проводят трехкратную экстракцию по 3 - 3V2 часа каждая. Все три полученные центрифугата соединяют, и дезоксирибонуклеопротеиды осаждают при добавлении трехкратного количества спирта. Такие препараты могут быть подвергнуты щелочному гидролизу с целью освобождения связанной ИУК и последующего ее выделения в чистом виде. [30]
Страницы: 1 2 3