Дезоксирибонуклеопротеид
Cтраница 3
Элонгация ( удлинение) цепи ДНК осуществляется ДНК-зависимыми ДНК-полимеразами. В этой реакции участвуют также и вспомогательные белки, наборы которых могут различаться в разных системах и на разных этапах репликации одного и того же генома. В первом случае важным вспомогательным участником реакции являются ДНК-связывающие белки, которые превращают матрицу в дезоксирибонуклеопротеид. При этом исчезают многие из элементов вторичной структуры матрицы, она как бы выпрямляется, что облегчает поступательное и процессивное движение ДНК-полимеразы. Сходную роль - помощь ДНК-полимеразе в преодолении препятствий, в частности шпилечных структур на матрице - могут играть и другие дополнительные ( в том числе и вирус-специфические) репликационные белки. [31]
Измерения вязкости проводили почти исключительно с целью изучения действия облучения на водные растворы дезоксирибонуклеиновой кислоты. При высоких скоростях сдвига действие облучения уменьшается, но еще легко измеримо. Если гель дезоксирибонуклеопротеида приготовлен на 0 1 М растворе хлористого натрия, белок и дезоксирибонуклеиновая кислота диссоциируют; в это же самое время ионное отталкивание вдоль цепочки нуклеопротеида уменьшается вследствие увеличения ионной силы. В результате спираль кислоты сокращается в размерах, межмолекулярное взаимодействие уменьшается и вязкость резко падает, стремясь к обычной характеристической вязкости. [32]
 |
Центрифужные весы. [33] |
Растирание продолжают в течение 10 - 15 минут. Содержимое ступки переносят в центрифужные пробирки, уравновешивают их на центрифужных весах ( рис. 8) и центрифугируют 10 - 15 минут. В стакан емкостью 100 - 150 мл наливают 80 - 90 мл дистиллированной воды и медленно, при помешивании стеклянной палочкой вливают в воду йолученный центрифугат. Нерастворимый в воде дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и наматывается в виде нитей на стеклянную палочку. Нити дезоксирибонуклеопротеида осторожно вынимают вместе с палочкой переносят Б чистую пробирку и растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % раствора едкого натра. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифенил-аминового реактива, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 5 - 10 минут. Жидкость постепенно приобретает синее окрашивание. [34]
Одна из интереснейших и фундаментальных проблем, связанных с синтезом белка в живой клетке, заключается в выяснении того, что заставляет аминокислоты, входящие в состав белка, соединяться между собой в последовательности, строго определенной для белка каждого типа. С этим тесно связан вопрос о том, каким образом информация о последовательности аминокислот воспроизводится в каждом новом поколении клеток. В настоящее время известно, что существуют вещества, содержащиеся в хромосомах клеточных ядер, ответственные за генетический контроль в растениях и животных. Химический анализ хромосом показал, что они состоят из гигантских молекул дезоксирибонуклеопротеидов, которые представляют собой дезоксирибонуклеиновые кислоты ( ДНК), связанные с белком. Установлено, что генетическую информацию при биосинтезе ферментов и других белков несет не белковая компонента нуклеопротеида, а ДНК; поэтому в настоящем разделе основное внимание будет уделено ДНК и прежде всего ее структуре. Заметим, что участки ДНК представляют собой химический эквивалент генов Менделя - единиц наследственности. [35]
Затем растертую массу центрифугируют в течение 10 - 15 мин. Центри-фугат переносят в стакан емкостью 100 - 150мл и медленно, при помешивании стеклянной палочкой, добавляют 80 - 90 мл дистиллированной воды. Нерастворимый в воде Дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и при помешивании стеклянной палочкой наматывается на нее в виде нитей. Палочку вместе с нитями осторожно вынимают и переносят в чистую пробирку, в которой Дезоксирибонуклеопротеид растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % - ного раствора NaOH. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифениламинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 5 - 10 мин. Смесь постепенно становится синей. [36]
Элонгация ( удлинение) цепи ДНК осуществляется ДНК-зависимыми ДНК-полимеразами. В этой реакции участвуют также и вспомогательные белки, наборы которых могут различаться в разных системах и на разных этапах репликации одного и того же генома. В частности, различны эти наборы при синтезе ДНК. В первом случае важным вспомогательным участником реакции являются ДНК-связывающие белки, которые превращают матрицу в дезоксирибонуклеопротеид. При этом исчезают многие из элементов вторичной структуры матрицы, она как бы выпрямляется, что облегчает поступательное и процессивное движение ДНК-полимеразы. Сходную роль - помощь ДНК-полимеразе в преодолении препятствий, в частности шпилечных структур на матрице - могут играть и другие дополнительные ( в том числе и вирус-специфические) репликационные белки. [37]
 |
Центрифужные весы. [38] |
Растирание продолжают в течение 10 - 15 минут. Содержимое ступки переносят в центрифужные пробирки, уравновешивают их на центрифужных весах ( рис. 8) и центрифугируют 10 - 15 минут. В стакан емкостью 100 - 150 мл наливают 80 - 90 мл дистиллированной воды и медленно, при помешивании стеклянной палочкой вливают в воду йолученный центрифугат. Нерастворимый в воде дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и наматывается в виде нитей на стеклянную палочку. Нити дезоксирибонуклеопротеида осторожно вынимают вместе с палочкой переносят Б чистую пробирку и растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % раствора едкого натра. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифенил-аминового реактива, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 5 - 10 минут. Жидкость постепенно приобретает синее окрашивание. [39]
Затем растертую массу центрифугируют в течение 10 - 15 мин. Центри-фугат переносят в стакан емкостью 100 - 150мл и медленно, при помешивании стеклянной палочкой, добавляют 80 - 90 мл дистиллированной воды. Нерастворимый в воде Дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и при помешивании стеклянной палочкой наматывается на нее в виде нитей. Палочку вместе с нитями осторожно вынимают и переносят в чистую пробирку, в которой Дезоксирибонуклеопротеид растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % - ного раствора NaOH. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифениламинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 5 - 10 мин. Смесь постепенно становится синей. [40]
 |
Центрифужные весы. [41] |
Растирание продолжают в течение 10 - 15 минут. Содержимое ступки переносят в центрифужные пробирки, уравновешивают их на центрифужных весах ( рис. 8) и центрифугируют 10 - 15 минут. В стакан емкостью 100 - 150 мл наливают 80 - 90 мл дистиллированной воды и медленно, при помешивании стеклянной палочкой вливают в воду йолученный центрифугат. Нерастворимый в воде дезоксирибонуклеопротеид выпадает в осадок и наматывается в виде нитей на стеклянную палочку. Нити дезоксирибонуклеопротеида осторожно вынимают вместе с палочкой переносят Б чистую пробирку и растворяют в 1 - 2 мл 0 4 % раствора едкого натра. К 5 - 10 каплям раствора дезоксирибонуклеопротеида добавляют равный объем дифенил-аминового реактива, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 5 - 10 минут. Жидкость постепенно приобретает синее окрашивание. [42]
Все операции следует проводить на холоде. Полученный гомогенат фильтруют через 1 - 2 слоя марли. Содержимое пробирки ( стакана) разделяется на 3 - слоя. Верхний ( водный), содержащий депротеинизирован-ную РНК, осторожно отсасывают при помощи шприца в чистую колбу и сохраняют. Средний слой, непрозрачный, вязкий, содержащий дезоксирибонуклеопротеиды и нерастворимые в феноле белки, подвергают вторичной обработке фенолом. Третий - прозрачный фенольный слой, содержащий растворимые в феноле белки, отбрасывают. [43]
Страницы: 1 2 3