Cтраница 2
Следует отметить, что все рассуждения относятся в основном к колоночному варианту ионообменной хроматографии. Если ионообменник используют в виде тонкого слоя или наносят на бумагу, то зоны веществ не элюируют из системы, а проводят качественное и количественное детектирование так же, как в тонкослойной и бумажной хроматографии. [16]
Обычно, при количественном детектировании сорбент удаляют с подложки, так как точность прямых измерений на пластинке подчас неудовлетворительна. [17]
Однако с точки зрения количественного детектирования метод гашения флуоресценции имеет ряд недостатков и ограничений по сравнению с методом отражения. [18]
Метод гашения флуоресценции позволяет определять только вещества с максимумом поглощения выше 240 нм, так как максимум возбуждения обычно используемого флуоресцентного индикатора находится около 280 нм. Сравнивая эти методы, можно сказать, что наилучшие результаты дает количественное детектирование по отражению по сравнению с пропусканием и гашением флуоресценции. Наиболее эффективным методом количественного анализа является измерение интенсивности флуоресценции веществ в слое сорбента. Это - высокоселективный, высокочувствительный ( особенно при использовании лазерных флуоресцентных детекторов) метод анализа с широким интервалом линейной зависимости количество вещества - интенсивность флуоресценции, не зависящий от формы зоны. Широкие возможности метода флуоресцентного детектирования в ТСХ связаны с возможностями дериватиза-ции веществ до или после ТСХ с превращением их в флуоресцирующие производные или инициированием флуоресценции разделенных веществ электрохимическими или химическими методами. [19]
По сравнению с классической ТСХ ВЭТСХ является значительно более быстрым методом, легче поддающимся стандартизации. Эффективность ВЭТСХ проиллюстрирована на практических примерах. Одновременно с этим изложены основные требования к оборудованию, применяемому для количественного детектирования ВЭТСХ-пластинок. [20]
Столик для сканирования ( рис. 8.27) хроматограмм с максимальным размером 20 X 20 см перемещается на подшипниках. Хроматограмму можно перемещать вручную в двух взаимно перпендикулярных направлениях ( х и у), а в продольном направлении ( г /) - с помощью синхронного двигателя со скоростью 1 - 300 мм / мин. Воспроизводимость установки хроматограммы в обоих направлениях равна 0 1 мм, что особенно важно при количественном детектировании ВЭТС-хроматограмм. Столик для сканирования легко доступен со всех сторон, что облегчает установку любого участка хроматограммы в зоне определения. Последнее обстоятельство особенно важно при двумерном разделении. В направлении х та у столик имеет такие размеры, которые позволяют проводить быстрое и надежное детектирование двумерных хроматограмм. [21]
При этом из-за длительного поступления небольших количеств нефтепродуктов в гидроэкосистему происходит угнетение флоры и фауны вплоть до полного исчезновения некоторых, наиболее требовательных к чистоте воды видов. Негативное влияние протяженной эмиссии нефтепродуктов связано также с тем, что их удаление из экосистем за счет самоочищения практически не происходит. Поэтому международные органы, в обязанность которым вменяется экологический мониторинг и контроль за выбросами токсичных веществ в окружающую среду, предъявляют повышенные требования к количественному детектированию, в том числе и углеводородов нефти, являющихся компонентами топлив и масел, содержащихся в судовых сточных водах. [22]
Известны лишь обзоры по отдельным разделам количественного детектирования, носящие частный характер и не дающие общей картины современного состояния этой области науки. [23]
В каждой из этих фракций, в свою очередь, на пластинке ТСХ определяется до десяти соединений. Такой прием продемонстрировал эффективность совместного использования двух хроматографических методов при определении веществ в диапазоне концентраций от нанограммов до пикограммов. Есть примеры сочетания ТСХ и газохроматогра-фическим пламенно-ионизационным детектором ( ПИД), когда на первом этапе идет разделение в тонком слое, а на втором этапе перевод анализируемых веществ из тонкого слоя в газовую фазу с последующим количественным детектированием на ПИД. Вместо пластин для ТСХ использовали етеклянно-керамичсские стержни диаметром 0.9 м со слоем силикагсля толщиной 50 - 100 мкм, которые для анализа протягивались через ПИД. Преимущество метода ТСХ-ПИД в его универсальности, высокой чувствительности ко всем классам органических соединений, но оптимален он для анализа веществ, обладающих средней летучестью. [24]
В то время как в КЖХ хроматографическая система жестко связана с детектором, в ТСХ разделение проводят в камере независимо от типа детектора. В связи с этим ТСХ является более гибким методом для решения разнообразных задач разделения и для разработки новых методик. Показания фотометрической детектирующей системы в ТСХ обычно не зависят от состава элюента. Жидкостную колоночную хроматографию целесообразно использовать в лаборатории для однотипных анализов, тогда как ТСХ с последующим фотометрическим детектированием - в лабораториях, где имеют дело с самыми различными задачами разделения. Дополнительным приемом при проведении количественного детектирования является удаление пятна вещества вместе с сорбентом с подложки. После этого проводят жидкостное извлечение вещества из сорбента. Широкому распространению этого метода мешает ряд препятствий. [25]
Для количественного детектирования применяют четыре разновидности оптического анализа. Денситометри-ческие методы измерения отраженного и прошедшего излучения оперируют с длиной волны исходного излучения. Флуоресцентные методы измеряют излучение с длиной волны, отличной от исходного излучения. Поскольку метод гашения флуоресценции не удовлетворяет многим требованиям количественного детектирования, то его целесообразно исключить из рассмотрения. [26]
Соответствующий раствор готовят добавлением к 10 мл лошадиной сыворотки Bacto ( полученной из лаборатории Difco, Детройт, Мичиган) 35 мл дистиллированной воды. Насыщение сорбента путем опрыскивания или пара помогает избежать отслаивания. Через 25 мин после этого проводят дополнительное опрыскивание 0 5 % - ным раствором индоксилацетата в перегнанном ацетоне. Затем пластинку облучают УФ-светом ( 253 нм) в течение 15 мин. Белые пятна указывают области, в которых пестицид подавляет холинэстеразу. Данные по количественному детектированию отсутствуют. [27]