Cтраница 2
NaOH, 30 мл дистиллированной воды и на кончике шпателя 30 мг кальцеина; раствор с осадком дает желто-зеленую флуоресценцию. Титрование проводят по каплям из бюретки при перемешивании раствором ЭДТА до исчезновения флуоресценции. [16]
К 100 мл анализируемого раствора прибавляют 2 - 3 капли 0 1 % - ного раствора малахитового зеленого и аммиак ( уд. ИРЕА растирают с 10 г KNOS) и титруют 0 01 М раствором комплексона III до исчезновения желтовато-зеленой флуоресценции. Результаты титрования дают сумму магния и кальция; в другой аликвотной части титруют кальций с тем же индикатором, необходимую среду создают нейтрализацией раствора при помощи 5 N NaOH и добавлением 2 мл избытка его. [17]
В присутствии ионов железа ( Fe3) свечение постепенно ослабевает. Окислители ( перекись водорода, бихроматы) и восстановители ( тиосульфат, гидроксиламин, аскорбиновая кислота) соответственно ускоряют и замедляют исчезновение флуоресценции реагента. Соотношение концентраций реагента и ионов железа, при котором происходит исчезновение флуоресценции, около 1000: 1; поэтому наиболее вероятной причиной гашения флуоресценции является окисление реагента, каталитически ускоряемое ионами железа. [18]
Флуорексон получен обработкой флуоресцеина формальдегидом и иминодиуксусной кислотой [1] и использован в качестве индикатора при титровании кальция комплексоном III. Предложено пользоваться смесью флуорексона и тимолфта-леина с хлористым калием [2] в соотношении 2: 1: 20 и титровать в ультрафиолетовом свете до исчезновения флуоресценции. [19]
При объемных определениях различных элементов все шире применяют органические металлофлуоресцентные индикаторы. Если индикатор с определяемым элементом образует флуоресцирующее соединение, то при связывании этого элемента комплексо-ном ( или иным комплексообразующим реагентом) в точке эквивалентности наблюдается исчезновение флуоресценции. Если индикатор флуоресцирует, а в присутствии определяемого элемента флуоресценция гасится, то точка эквивалентности определяется по возникновению флуоресценции. [20]
Зейбольд и Эгле сочли эти результаты доказательством того, что практически весь хлорофилл в листьях находится в нефлуоресцирующем состоянии ( вероятно, связан с белком); малая же доля пигмента растворена в липоидной фазе и поэтому способна флуоресцировать. Они полагали, что при высушивании фракция хлорофилла, обычно присутствующая в липоидной фазе, переводится в водно-коллоидное состояние, тогда как при нагревании хлорофилл сначала экстрагируется из липоидной фазы в коллоидно-белковую фазу, что приводит к исчезновению флуоресценции, но позднее возвращается в липофильное вещество ( в связи с денатурацией белков и плавлением липоидов) и вследствие этого опять начинает флуоресцировать. [21]
Сосуд тщательно встряхивают для того, чтобы растворить весь бериллий, который сильно сорбируется на стеклянной поверхности. Полученный раствор переносят в мерную колбу на 25 мл, добавляют 1 и. NaOH до исчезновения голубой флуоресценции, 5 мл буферного раствора, II мл раствора морина и воды почти до метки. Затем выдерживают на водяной бане 20 мин для термоста-тирования при комнатной температуре, добавляют воды до метки и помещают в термостатированный держатель кюветы. Чтобы избежать изменения температуры кюветы, не следует ее трогать пальцами. [22]
Патровски [ 53 ( 38) ] в своей ранней работе описывает титрование галлия в - УФ-лучах при применении морина в качестве флуоресцентного индикатора. Оно выполняется либо в растворе, содержащем ацетатную буферную смесь, либо ipH pH3 5 в растворе, содержащем ацетат и фторборат [ 55 ( 36) ], причем в последнем случае маскируется А1 при содержании его до 40-кратного избытка. Точка эквивалентности фиксируется по внезапному исчезновению флуоресценции. Еще они считают, что выгодна добавка небольшого количества индикатора метилового красного, так как при этом маскируется остающаяся в точке эквивалентности незначительная остаточная флуоресценция и точка эквивалентности оказывается заметно более резкой, так что титрование может быть проведено даже без УФ-лампы, а лишь на ярком. [23]
К аликвотпой части слабокислого раствора пробы, предназначенной для определения кальция, добавляют 1 и. Раствор титруют раствором ДГТА до исчезновения флуоресценции. Окраска изменяется с желтой на розовую. [24]
Точку зрения Либальдт разделяет Штерн [120, 121], который рассматривал флуоресценцию хлорофилла in vivo как наиболее важный признак его состояния. Этот исследователь наблюдал, что нефлуоресцирующие коллоидные растворы хлорофилла можно заставить флуоресцировать добавлением липоида ( мыла, олеиновой кислоты, лецитина); липоид переводит коллоид в эмульсию, причем пигмент образует истинный раствор в липоидных каплях. Вакки [132] нашел, что присутствие олеата натрия мешает исчезновению флуоресценции спиртового раствора хлорофилла при разведении его водой. Это показывает, что олеат и хлорофилл связываются в коллоидные частицы и что такая связь препятствует гашению флуоресценции. [25]
В присутствии ионов железа ( Fe3) свечение постепенно ослабевает. Окислители ( перекись водорода, бихроматы) и восстановители ( тиосульфат, гидроксиламин, аскорбиновая кислота) соответственно ускоряют и замедляют исчезновение флуоресценции реагента. Соотношение концентраций реагента и ионов железа, при котором происходит исчезновение флуоресценции, около 1000: 1; поэтому наиболее вероятной причиной гашения флуоресценции является окисление реагента, каталитически ускоряемое ионами железа. [26]
Далее прибавляют три капли 0 1 % - ного раствора хинина в 1 % - ной НСЮ4 и нейтрализуют конц. Раствор переносят в мерную колбу емкостью 25 мл, прибавляют 1 N раствор NaOH до исчезновения флуоресценции. Затем вводят 5 мл буферного раствора, содержащего в 500 мл 15 г ДТРА, 75 мл пиперидина и 20 г Маг5Оз и добавляют 1 мл 0 0075 % - ного спиртового раствора морина; перемешивают, тер-мостатируют и разбавляют раствор до метки. Раствор выдерживают при постоянной температуре и измеряют интенсивность флуоресценции через 20 мин. Аналогичным образом готовят и измеряют стандартные растворы. [27]
Далее прибавляют три капли 0 1 % - ного раствора хинина в 1 % - ной НС1О4 и нейтрализуют конц. Раствор переносят в мерную колбу емкостью 25 мл, прибавляют 1 N раствор NaOH до исчезновения флуоресценции. Затем вводят 5 мл буферного раствора, содержащего в 500 мл 15 г ДТРА, 75 мл пиперидина и 20 г Na2SOs и добавляют 1 мл 0 0075 % - ного спиртового раствора морина; перемешивают, тер-мостатируют и разбавляют раствор до метки. Раствор выдерживают при постоянной температуре и измеряют интенсивность флуоресценции через 20 мин. Аналогичным образом готовят и измеряют стандартные растворы. [28]
Флашка и Пюшель [47] предложили метод последовательного определения In, Cd и Zn в присутствии Fc, которое связывают аскорбиновой кислотой. Cd и In связывают цианидом в аммиачном растворе. После титрования In разрушают цнанидные комплексы Zn и Cd кипячением с формальдегидом и титруют их сумму комплексоном III. По Патровскому [71], титрование производится в ультрафиолетовом свете по исчезновению флуоресценции морина. Флашка и Задек [48] предложили пирокатехинфиолетовый в качестве индикатора. Киннунен и Ме-риканто [56] предложили для обратного титрования раствором солей Zn индикатор цийкон ( 2-карбокси - 2 / - окси-5 / / - сульфоформазил. Титрование производится при рН 9 - 10 в аммиачном буферном растворе. Ченг и Брей [62, 63] предложили для прямого титрования In в присутствии ряда элементов устойчивый индикатор 1 - ( 2-ниридилазо) - 2-нафтол. [29]
Мы говорили до сих пор только о тех изменениях интенсивности флуоресценции, которые обусловливаются взаимодействием молекулы хлорофилла в возбужденном состоянии со средой. Однако во введении было упомянуто, что может иметь место и другой тип эффектов флуоресценции, при котором изменение молекулы хлорофилла происходит еще в темноте, до возбуждения. Это изменение должно проявляться в изменении спектра поглощения. Одно из возможных изменений этого типа обусловлено тем, что хлорофилл способен ди-меризоваться или полимеризоваться в некоторых растворителях, оставаясь мономерным в других. Как известно, димеризация приводит к исчезновению флуоресценции у многих красителей, таких, например, как метиленовый синий в водных растворах. У хлорофилла подобных явлений до сих пор еще не обнаружено, если не рассматривать отсутствие флуоресценции коллоидных растворов и твердого хлррофилла как результат тушения, связанного с полимеризацией. Другой тип ассоциации, однако, должен иметь важное значение в этом случае; это - ассоциация молекул хлорофилла с гидроксильными группами или аминогруппами, имеющимися в молекулах растворителя; по контрасту с тушащим действием димеризации ассоциация этого типа, повидимому, необходима для появления флуоресценции хлорофилла. [30]