Cтраница 4
Cso - - Ceo), активированный при переносе сахарофосфата. Так образуются олигосахаридные блоки ( от тетра - до октасахаридов), из которых путем последовательного их присоединения к редуцирующему концу цепи и образуется полисахарид. Точный механизм удлинения цепи и высвобождения полимера неизвестен. Однако участие изо-преноидных липидов не является обязательным: например, они не обнаружены у Azotobacter, синтезирующего альгинат. В тех организмах, где эти липиды присутствуют, контроль за синтезом экзополисахаридов может осуществляться за счет изменения доступности таких липидных переносчиков, которая в свою очередь может регулироваться изменением соотношения между свободным спиртом и фосфатом. Регуляция путем де-фосфорилирования требует наличия АТР-зависимой киназы для реактивации свободного спирта. Сзв-изопреноид-алкоголь - кина-за ингибируется антибиотиком моеномицином. [46]
Мы уже упоминали, что в аксоплазме имеются такие филамент-ные структуры как нейрофиламенты. Поэтому нейрофиламенты составляют класс промежуточных, филаментов [6], которые были найдены в различных клетках и к которым принадлежат кератиновые филаменты эпителиальных клеток, глиальные филаменты и десминовые филаменты клеток мышц. Их функциональная роль заключается в создании своеобразного клеточного скелета. В электронном микроскопе видны разветвления волокон. Они чувствительны к действию Са2 - зависимой протеазы и поэтому их нелегко получить в интактном состоянии. Все белки нейрофиламентов фосфорилируются сАМР - зависимой киназой. [47]
Причины специфичности взаимодействия Cibacron Blue с белками остаются неясными. Первоначально этот лнганд был успешно использован для очистки ряда дегидрогеназ, киназ и мутаз - ферментов, имеющих в активном центре пространственную структуру так называемой динуклеотидной складки, образованной примерно 120 аминокислотами. В этой структуре связываются НАД, ADP или АТР. Было замечено, что пространственная конфигурация красителя напоминает таковую для НАД, причем сульфогруппы расположены примерно в тех же местах, что фосфаты у кофермента. Поэтому Ион предлагает отнести Cibacron Blue к числу имфилитов - сорбентов со смешанной ионно-гидрофобной функцией, для которых некая биоспецифичность получается в результате случайного пространственного соответствия комбинации этих функций какому-то участку белка. Вместе с тем отмечалось, что краситель Procion Red HE3B имеет большее сродство к НАДФ - зависимым дегидрогеназам и киназам, но меньшее - к НАД - зависимым, чем Cibacron Blue. [48]
Рассматривая промежуточный обмен углеводов в печени, необходимо также остановиться на превращениях фруктозы и галактозы. Поступающая в печень фруктоза может фосфорилироваться в положении 6 до фруктозо-6 - фосфата под действием гексокиназы, обладающей относительной специфичностью и катализирующей фосфорилирование, кроме глюкозы и фруктозы, еще и маннозы. Однако в печени существует и другой путь: фруктоза способна фосфорилироваться при участии более специфического фермента-фруктокиназы. В результате образуется фруктозо-1 - фосфат. Эта реакция не блокируется глюкозой. Далее фруктозо-1 - фосфат под действием альдолазы расщепляется на две триозы: диоксиацетонфосфат и глицераль-дегид. Под влиянием соответствующей киназы ( триокиназы) и при участии АТФ глицеральдегид подвергается фосфорилированию до глицеральдегид-3 - фосфата. Последний ( в него легко переходит и диоксиацетонфосфат) подвергается обычным превращениям, в том числе с образованием в качестве промежуточного продукта пировиноградной кислоты. [49]
Получить ауксотрофные мутанты, способные накапливать конечные продукты неразветвленных цепей биосинтеза, например L-аргинин, невозможно. В таких случаях приходится отбирать мутанты с частично нарушенной регуляцией биосинтеза, что позволяет получить повышенный выход конечного продукта. Такие мутанты известны под названием регуляторных; их отбирают по устойчивости к аналогам аминокислот или же средин ревертантов ауксотрофов. В основе использования аналогов-аминокислот лежит их сходство с природными аминокислотами. Они ингибируют рост бактерий, но этот эффект может быть уменьшен путем добавления соответствующей природной аминокислоты. Таким образом, аналоги выступают в роли искусственных, работающих по принципу обратной связи, ингибиторов-ферментов, обеспечивающих биосинтез природных аминокислот. Появление мутантов, устойчивых к этим ложным ингибиторам, означает, что регуляторные ферменты соответствующего пут № обмена становятся у них нечувствительными к аналогу. Так, серусодержащий аналог лизина 5 - ( 2-аминоэтил) - Ь - цистеин является у Brevibacterium flauum ложным, действующим по принципу обратной связи ингибитором аспартокиназы. Устойчивые к его действию мутанты вырабатывают фермент, который в 150 раз менее чувствителен к ингибированию по механизму обратной связи, чем фермент исходного штамма, и в результате продуцируют до 33 г / л лизина. Так, у Corynebacterium gtutamicum и Brevibac-teriutn flavum сверхпродукции L-треонина не наблюдается, поскольку происходит сочетанное ингибирование по механизму обратной связи аспартокиназы и L-треонином, и L-лизином. L-треонин ингибирует и гомосериндегидрогеназу. Мутант, устойчивый к аналогу треонина, а-амино-р-оксивалериановой кислоте, синтезирует в избыточном количестве треонин, так как: ферменты его, ингибированные этой аминокислотой, десенсибилизированы. Принимающие участие в синтезе треонина гомо-сериндегидрогеназа и киназа также выключаются L-метиони-ном, и поэтому ауксотрофы по метионину образуют L-треонив-с еще большим выходом. [50]