Cтраница 3
Теория всех этих методов рассматривается Снайдером [23], здесь же мы обсудим только некоторые практические соображения. Однако в первом случае сокращается и оптимизируется длительность анализа. Поскольку разрешение зон веществ часто больше, чем это необходимо, особенно при разделении проб с очень большими значениями / с, сокращение длительности разделения вполне допустимо. Кроме того, при программировании пробы элюируются в виде острых и концентрированных зон. При этом увеличивается чувствительность определения позднее выходящих пиков. Использовать эти методы программирования в жидкостной хроматографии при высоком давлении достаточно сложно, однако возможности разделения и область применения метода при этом увеличиваются. [31]
Изоэлектрическое фокусирование в геле имеет определенные преимущества по сравнению с ИФ в среде со стабилизованным градиентом плотности. Эти преимущества состоят в следующем: 1) сокращается длительность разделения; 2) полностью подавляется термическая конвекция; 3) применяется простое оборудование для ИФ; 4) возможно одновременное разделение нескольких образцов; 5) возможно обнаружение с помощью различных красителей и различных методик; 6) возможно объединение ИФ и зонного электрофореза в двухмерном варианте; 7) достаточно небольшого количества образца; 8) возможно обнаружение белков методом иммунодиффузии. Однако при применении геля возникают проблемы, связанные с молекулярно-ситовым эффектом, который имеет место в основном при разделении больших молекул. В настоящее время этот метод ( сокращенное обозначение ИФПАА или ПАГИФ) является общепринятым и широко используется. В отдельных случаях, согласно данным [73], при проведении дискретного трубчатого электрофореза в полиакриламидном геле допускается окрашивание. Типичный градиент напряжения для 8-часового разделения составляет 200 В на 60 мм. Если тепло отводится, то напряжение можно увеличить и соответственно сократить длительность разделения. [32]