Cтраница 3
Подвижная фаза ( элюент) в том виде ионообменной хроматографии, который нас будет интересовать, всегда в основе своей водная. Главные ее физические параметры - рН, концентрация и природа растворенных солей. Определенную роль могут играть добавки органических растворителей, изменяющие полярность и диэлектрическую проницаемость элюента. [31]
Частичная или полная замена воды на органический растворитель для увеличения связывания реагентов в комплекс является одним из распространенных приемов спектрофотометрического анализа. Изучение комплексообразования в водно-органических растворителях показало, что в большинстве случаев наблюдается рост устойчивости комплексных соединений при увеличении концентрации неводного компонента. Для выяснения причин сложного влияния добавок органических растворителей к водным растворам на устойчивость комплексов необходимо расширение экспериментального материала. [32]
В качестве ПФ используют водные растворы аммиака в смеси с ацетонитрилом. Следует помнить, что силикагель растворяется в щелочных расгворах, добавка органического растворителя уменьшает растворимость сорбента. Вместо аммиака в ряде случаев испод ьзовали пиридан. [33]
Этот выбор диктуется в основном стремлением сохранить натив-ность очищаемого белка и максимально уменьшить неспецифическую сорбцию других компонентов исходной смеси. Само аффинное связывание вещества с лигандом, как правило, от состава буфера жидкой фазы зависит мало. Интересами сохранения нативности и растворимости белка диктуются выбор рН, наличие соли, а иногда ( например, для белков мебран) введение в буфер добавок органических растворителей или детергентов. Все это определяется известными свойствами данного белка. Неспецифическая сорбция примесей, в частности балластных белков, на матрице и спейсерах происходит за счет тех же самых сил ( притяжения разноименно заряженных групп, водородных связей и гидрофобных взаимодействий), которые обусловливают и биоспецифическое связывание вещества с лигаи-дом. Избирательность и прочность аффинной связи обусловлены кооперативным действием различных сил в области связывания, где они дополняют друг друга. Благодаря такой кооперации имеется возможность ввести в буфер факторы, ослабляющие действие сил какого-либо типа или даже всех их одновременно, но в такой степени, что биоспецифическое аффинное взаимодействие будет ослаблено лишь частично, в то время как неспецифическую сорбцию удастся подавить практически полностью. [34]
Растворимость карбоксилсодержащих полимеров зависит от их молекулярного веса, приходящегося на одну нейтрализованную карбоксильную группу [ 140, с. Наиболее высокую стабильность имеют пленкообразующие на основе малеинизированных масел ( к. Особо важную роль в стабилизации водных растворов смол играют добавки органических растворителей, о чем будет сказано ниже. [35]
Известно, что азоиетин сильно подвержен кислотному гидролизу, но относительно устойчив при повышении щелочности раствора, поэтому гидролиз реактива может быть уменьшен повышением щелочности раствора. Однако, используя тот факт, что комплексные соединения с соотношением M: R 1: 1 не лю-минесцируют, на кривой насыщения MOJCHO проследить образование нескольких комплексов, если выполнять определение как люминесцентным, так и спектрофотометрическим методами. В то же время при использовании люминесценции наблюдаемое соотношение ( AL ] - [ Lug ] равно 1: 1; причем при дальнейшем прибавлении реактива интенсивность свечения падает, так как происходит ступенчатое образование следующего, нелшинесцирующего комплекса. Аналогичные соотношения [ И ] [ Lig ] наблюдаются и в случае галлия и индвя. При введении добавок органических растворителей наблюдается изменение спектров поглощения и люминесценции и ( или) изменяется интенсивность поглощения и излучения. [36]