Cтраница 2
Предназначенные для опыта листья быстро укрепляются ( по возможности равномерно) на проволочном каркасе камеры. Колба плотно закрывается, включается ток воды через холодильник, и в камере создается небольшое разрежение. Затем через воронку подводящей трубки А вводится определенное ( рассчитанное по навеске ВаС14Оз) количество молочной кислоты. Момент вливания молочной кислоты в тигель или колбу с навеской ВаС14Оз отмечается как начало экспозиции. При окончании экспозиции камера закрывается светонепроницаемым чехлом и одновременно с этим производится быстрое удаление не поглощенной листом углекислоты. Для этого отводная трубка Б последовательно соединяется с двумя большими колбами, в которые предварительно был налит раствор Ва ( ОН) 2 и создано сильное разрежение. Такое приспособление позволяло в течение очень короткого интервала времени, обычно не превышавшего 10 сек. [16]
Молочная кислота образуется в мышцах в анаэробных условиях и является конечным продуктом гликолиза. Количество образовавшейся молочной кислоты эквивалентно количеству распавшейся глюкозы. Установлено, что содержание молочной кислоты в крови человека и животных повышается после мышечной работы. Особенно резкое увеличение количества молочной кислоты наблюдается после усиленных мышечных упражнений. Однако уровень молочной кислоты в крови быстро снижается, так как она поглощается печенью и превращается там в гликоген. Ресинтез гликогена из молочной кислоты не может протекать самопроизвольно и осуществляется только при условии сопряжения его с окислительными процессами, дающими энергию. По данным Пасте-ра и Мейергофа, ресинтез гликогена сопряжен с окислением некоторой части молочной кислоты до углекислого газа и воды. Основная масса молочной кислоты при этом превращается в гликоген. В настоящее время установлено, что в аэробных условиях при достаточном притоке кислорода гликоген и глюкоза окисляются через стадию пировиноградной кислоты до СО2 и Н2О, минуя образование молочной кислоты ( см. стр. [17]
Раствор нагревают до кипения, причем фиолетовая окраска должна сохраниться, и после охлаждения приливают раствор перекиси водорода до полного обесцвечивания. Еще раз кипятят, фильтруют, хорошо промывают осадок и осаждают в фильтрате щавелевую кислоту в виде оксалата кальция, предварительно подкислив раствор уксусной кислотой. Осадок оксалата кальция высушивают на фильтре, переводят прокаливанием в окись кальция и в таком виде взвешивают. По весу СаО вычисляют количество молочной кислоты. [18]
При окислении же 0 5-процентным раствором бихромата калия молочная кислота окисляется в уксусную кислоту, углекислоту и воду, а окси-масляная-в ацетон, углекислоту и воду. После окисления обеих кислот раствором перманганата калия и перегонки продуктов окисления в дестилляте будут присутствовать уксусный альдегид, образовавшийся из молочной кислоты, и небольшое количество ацетона, полученного в результате окисления jB - окси-масляной кислоты. Дестиллят делят на две части: в одной определяют сумму уксусного альдегида и ацетона бисульфитным методом, в другой части окисляют уксусный альдегид в щелочной среде перекисью водорода до уксусной кислоты, отгоняют ацетон и определяют последний иэдсметрически. Разница между результатами бисульфитного и иодометрического определений указывает на количество уксусного альдегида, а таким образом и на количество молочной кислоты. [19]
Кроме различных колориметрических ультрамикрометодов определения молочной кислоты [62], известен только один объемный ультрамикрометод, позволяющий определять молочную кислоту в количествах порядка нескольких микрограммов. Этот метод основан на титровании. Следует отметить также метод определения молочной кислоты по Виннику [63], основанный на впервые предложенной Гордоном и Куастелем [64] реакции окисления с помощью сульфата церия с использованием кюветы Конвея. Этот метод позволяет определять молочную кислоту в количествах порядка долей миллиграмма. Этот метод возник в результате усовершенствования объемных методов Фридмана, Котонио и Шаффера [66], а также Фридмана и Грезера [67] с целью снижения количества анализируемой молочной кислоты до нескольких микрограммов. Метод был испытан для образцов, содержащих от 1 до 25 у молочной кислоты. [20]
В серию пробирок вводится точное постепенно снижающееся количество аминокислоты в растворе; ставятся параллельно по два опыта. Ряд стандартов охватывает от 0 0 до 0 1 мг с / / - ва-лина, ( / / - лейцина и с ( / - изолейцина. Последовательные пробирки не должны отличаться друг от друга более чем на 0 02 мг. Затем во все пробирки добавляют по 5 мл соответствующей опыту питательной среды и воды до конечного объема в 10 мл. Содержимое пробирок смешивают, затыкают ватными пробками и стерилизуют в течение 15 мин. Содержание искомой аминокислоты вычисляют на основании количеств молочной кислоты, образовавшихся в опытных и в стандартных растворах. [21]
В центрифужную пробирку отмеряют 5 мл прозрачного центрифу-гата или фильтрата и добавляют 1 25 г порошка Са ( ОН) 2 для осаждения углеводов. Содержимое пробирки тщательно размешивают несколько раз стеклянной палочкой. Дают постоять около получаса и центрифугируют. Охлаждают смесь льдом при постоянном взбалтывании и добавляют постепенно 3 мл раствора H2SO4 для перевода молочной кислоты в ацетальдегид. Пробирку ставят на 4 мин в кипящую водяную баню и тотчас же после этого ставят вновь вводу со льдом. Через 2 мин прибавляют точно 0 1 мл 0 125 % - ного раствора вератрола и взбалтывают. Спустя 20 мин колориметри-руют через синий светофильтр в фотоэлектроколориметре. Количество молочной кислоты определяют по калибровочной кривой, для построения которой берут растворы, содержащие от 0 01 мг до 0 1 мг или даже до 2 мг кислоты в 1 мл. К 0 5 мл этих растворов добавляют 3 мл раствора H2SO4, ставят на 4 мин в кипящую водяную баню и тотчас после этого - в лед. Через 2 мин прибавляют 0 1 мл раствора вератрола и взбалтывают. Через 20 мин колориметрируют и составляют калибровочную кривую. [22]
Кроме различных колориметрических ультрамикрометодов определения молочной кислоты [62], известен только один объемный ультрамикрометод, позволяющий определять молочную кислоту в количествах порядка нескольких микрограммов. Этот метод основан на титровании. Следует отметить также метод определения молочной кислоты по Виннику [63], основанный на впервые предложенной Гордоном и Куастелем [64] реакции окисления с помощью сульфата церия с использованием кюветы Конвея. Этот метод позволяет определять молочную кислоту в количествах порядка долей миллиграмма. Этот метод возник в результате усовершенствования объемных методов Фридмана, Котонио и Шаффера [66], а также Фридмана и Грезера [67] с целью снижения количества анализируемой молочной кислоты до нескольких микрограммов. Метод был испытан для образцов, содержащих от 1 до 25 у молочной кислоты. Таким образом, несмотря на уменьшение количества анализируемой молочной кислоты на два-три порядка, точность описанного здесь ультра-микрометода не у ступает точности микрометода, на основе которого он был разработан. [23]