Двухцепочечный комплекс

Cтраница 2

Иногда наблюдается и более сложная функция олиго - или поли-нуклеотида в ферментативной полимеризации. Так, при добавлении к ДНК-полимеразе двухцепочечных комплексов олигодезокси-нуклеотидов, цепи которых имеют различную длину, происходит достраивание их до полных двухцепочечных комплексов. При этом одна из цепей комплекса служит затравкой полимеризации, а другая - матрицей, определяющей нуклеотидную последовательность синтезирующегося участка полимера. [16]

Изменение оптической плотности с изменением молярного соотношения двух полимеров вновь проходит через резкий минимум, что указывает на наличие стабильного комплекса. Однако этот минимум появляется при соотношении урацил: аденин, равном 2: 1, а комплекс является трехцепочечным с константой седиментации примерно на 50 % выше константы седиментации двухцепочечного комплекса. Третья цепочка полиуридиловой кислоты, по-видимому, заполняет глубокий спиральный желобок двойной спирали, замещая на этой поверхности молекулы воды и, таким образом, мало влияя на силы сцепления или факторы, определяющие форму комплекса. Вероятно, что второй остаток урацила в каждом триплете оснований присоединен к паре аденин - урацил в исходном комплексе посредством водородных связей между О6 и N1 урацила и 6-аминогруппой и N7 аденинового остатка. [17]

Двойные и тройные спирали гомополирибонуклеотидов. [18]

Двухцепочечный полимер поли - ( А И) образуется из поли - А и поли - И со скоростью, возрастающей по мере увеличения ионной силы раствора. При ионной силе, равной нулю, образование комплекса не происходит, поскольку силы отталкивания превосходят силы, приводящие к образованию комплекса. Эффективность двухвалентных катионов в создании условий для образования двухцепочечных комплексов приблизительно в 100 раз выше эффективности одновалентных катионов. Полиамины, также нейтрализующие заряды фосфатных групп, имеют приблизительно ту же эффективность, что и двухвалентные катионы. [19]

Для определения молекулярного веса ДНК ( обзоры - см. 7 1в п) наиболее широко используются методы, основанные на определении скорости седиментации макромолекул. В данном случае распределение веществ по скорости осаждения можно контролировать по радиоактивной метке, что обеспечивает высокую чувствительность; с другой стороны, методика практически без изменений может быть применена и для препаративного разделения нуклеиновых кислот. Предложен ряд эмпирических уравнений, связывающих скорость седиментации двухцепочечного комплекса ДНК со значением молекулярного веса 19 - 24, определенным независимыми методами. Последнее из этих уравнений24 охватывает пределы мол. [20]

Определение содержания ДНК на одну вирусную частицу показывает, что обычно в состав частицы входит либо одна молекула ДНК, либо один двухцепочечный комплекс. Естественно поэтому ожидать, что препараты ДНК, выделенные из вирусов, будут индивидуальными в химическом смысле молекулами ДНК или по крайней мере комплексами из двух индивидуальных молекул. Это предположение оправдывается во многих случаях, причем иногда удается после разрушения двухцепочечного комплекса разделить с помощью равновесного центрифугирования индивидуальные по-линуклеотидные цепи. [21]

Единственно надежным абсолютным методом определения молекулярного веса, используемым для высокополимерной ДНК, является метод20, основанный на авторадиографии молекул ДНК, меченных 32Р; подсчет звезд на эмульсии фотопластинки позволяет определить количество атомов фосфора в исследуемой молекуле. Этот метод является весьма трудоемким и использован лишь в немногих случаях. Исходя из данных рентгеноструктурных исследований двух-спиральных комплексов ДНК, показывающих, что длине двухцепочечного комплекса 1 А соответствует мол. [22]

Для выделения ДНК из хлоропластов 88 - 90 используют тот же самый прием, что и при выделении митохондриальной ДНК, - обработку субклеточных частиц ДНК-азой перед их разрушением. В этом случае, однако, не удается добиться полного удаления ядерной ДНК, и ДНК хлоропластов очищают далее равновесным центрифугированием в градиенте плотности CsCl. Наиболее подробному исследованию подвергалась ДНК из хлоропластов зеленой водоросли Euglena gracilis 91; она отличается от ДНК ядра по составу оснований и существует в виде двухцепочечного комплекса с мол. [23]

Генетические данные позволяют предположить, что в состав клеточного ядра бактерий входит одна молекула ДНК чрезвычайно высокого молекулярного веса. После разрушения бактерий в очень мягких условиях удалось наблюдать44 с помощью метода авторадиографии структуры ДНК, длина которых соответствует мол. Современные методы выделения нуклеиновых кислот не позволяют получить такие огромные молекулы в интактном состоянии. Даже при самом тщательном выделении препараты ДНК имеют значительно меньший молекулярный вес. Так, из Hetnophilis influenzae получен препарат ДНК45 46, поведение которого при ультрацентрифугировании и длина под электронным микроскопом соответствуют мол. При обычных же методиках получения ДНК8 12 37 49 50 выделяют двухцепочечный комплекс с мол. Естественно ожидать, что полученные препараты бактериальной ДНК являются многокомпонентными смесями и выделение индивидуальных соединений из этих смесей представляется при современных методах фракционирования весьма затруднительным. [24]

На рис. 17 этот процесс показан в виде схемы. Нижняя часть молнии здесь еще не расстегнута, а в верхней части и справа и слева как раз идет достраивание комплементарных цепей. Ясно видно, что обе новые двухцепочечные молекулы полностью тождественны друг другу. Но ДНК ведь содержит генетическую информацию. Следовательно, происходит редупликация этой информации - образуются не просто две одинаковые двухцепочечные молекулы, но две молекулы, содержащие идентичную информацию. Если теперь клетка будет делиться, то обе дочерние клетки получат по одному двухцепочечному комплексу; тем самым обе они приобретают совершенно равноценную информацию, и притом информацию, идентичную той, которой обладала материнская клетка. [25]

Страницы: 1 2