Аминогруппа - лизин
Cтраница 2
Все а - аминокислоты и образованные из них пептиды в большинстве случаев реагируют при комнатной температуре с азотистой кислотой количественно в течение 5 мин. Вторая аминогруппа лизина ( е-поло-жение) реагирует в течение 30 мин. Азот, входящий в состав пирро-лидинового, индолового и имидазолового колец, не реагирует, поэтому в результате анализа определяется только половина всего количества азота триптофана, треть количества азота гистидина и четверть количества азота аргинина. Пролин и оксипролин совсем не отщепляют азота, Гуанидиновая группировка HjN - C ( NH) - HN - , содержащаяся в гуа-ниди-не, креатине и аргинине, не реагирует с азотистой кислотой. [16]
Для того чтобы освободить фосфатные группы НК от белков, препарат обрабатывают уксусным ангидридом при 45 или 60 в течение 4 часов. При этом ацетилируют аминогруппы лизина и аргинина и достигают максимального связывания красителя. Идеальным является одновременное блокирование карбоксильных групп белка, которые в слабокислой среде могут конкурировать за краситель. [17]
Здесь не будет обсуждаться возможная роль гуанидина, а также ОН -, SH - или иных групп, так как эта проблема в целом слишком велика и будет рассмотрена в статье IV в связи с вопросом о реакционной способности боковых цепей белков. Однако е - аминогруппы лизина, а также - и у-карбоксильные группы соответственно аспарагиновой и глутаминовой кислот, очевидно, способны участвовать в истинных разветвленных пептидных связях. [18]
Для связывания белка не требуется предварительно активировать носитель. Связывание фермента ( через аминогруппы лизина или гидроксильные группы серина и тирозина) происходит при определенных значениях рН, различных для разных ферментов. [19]
Особенно хорошо изучены функции свободных аминогрупп карбоксилов, гидроксила, тиоловых групп, имида-зола, гуанидина, фенольной группы, тиоэфирных групп и некоторых других. Свободная и удаленная от карбоксила аминогруппа лизина ведет себя почти самостоятельно, и сосредоточивание таких групп в определенных белках ( лизоцим) придает этим белкам основные свойства. Карбонильные соединения образуют с аминогруппой аль-диминную группировку, способную к различным дальнейшим превращениям: гидролизу, восстановлению, замещению, присоединению. [20]
В процессе образования пептидной связи необходимо защищать реакци-онноояоообныв боковые группы некоторых аминокислот. К ним относятся: / - аминогруппа лизина, ув-амяногруппа орнитина, гуанидиновая группа аргинина, карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот, гидрокоилыше и тиольные группы серина, треонина, тирозина и цистеи-на, имидазольное кольцо гистидина. В некоторых случаях осуществляют блокирование боковых групп метиояина, аспарагина и глутвми-на. Недавно предложены защитные группы для индольного кольца триптофана. [21]
Применение динитрофенильных производных, введенных в практику Зангером [25] с целью идентификации и количественного определения концевых аминогрупп, позволяет получить ценные сведения о количестве открытых цепей в белке. В этом отношении полезными являются также е - аминогруппы лизина. [22]
Вместе с тем отщепление с С-конца от одного до 14 аминокислотных остатков не оказывает заметного влияния на биологическую активность АКТГ. Связывание с рецепторами на мембране клеток надпочечников обеспечивается s - аминогруппами лизина, находящимися в 11, 15 и 16 положениях, а также остатком тирозина во втором положении полипептидной цепи. [23]
Предполагают, что транспепти-даза расщепляет пептидную связь между двумя остатками аланина и прикрепляется к карбоксильной группе предпоследнего аланина. Затем связанный фермент катализирует образование сшивки между свободной группой ( аминогруппой лизина) и карбонилом D-аланина. [24]
При обработке ТД цинкового комплекса бычьего инсулина было показано, что один из двух остатков гистидина и три из четырех остатков тирозина образуют бмс-производные, по одному остатку гистидина и тирозина образуют монопроизводные. Помимо гистидина и тирозина, ТД модифицирует триптофан, сульфгидрильную группу цистеина, реагирует по аминогруппам лизина и N-концевым аминокислотам пептидов. Однако продукты реакции не мешают фотометрированию при 480 нм и в более длинноволновой части спектра. При модификации с помощью ТД рибонуклеазы Т4 Касаи и Эндо [93] показали, что реакция идет по определенному остатку тирозина ( Туг 4 или Туг 11), по остатку лизина и аланина. [25]
В принципе для этих целей пригоден любой из основных красителей. Для этого, однако, необходимо знать, в какой мере тот или иной краситель конкурирует за фосфатные группы ДНК с аминогруппой лизина и гуанидиловой группой аргинина основных белков. [26]
 |
Схема биосинтеза пептидогликана у Staphylococcus aureus ( no Г. Шлегелю. [27] |
На третьем этапе происходит его встраивание в пептидоглика-новый скелет и образование пептидных связей. Эта поперечная сшивка осуществляется путем транспептидирования, при котором расщепляется связь между двумя остатками D-аланила и освободившаяся карбоксильная группа связывается с аминогруппой лизина второго олигопептида, а концевой D-аланин освобождается. [28]
Как уже указывалось, гуанидиновые группы аргинина остаются заряженными при максимально достижимых рН и не дают вклада в кривую титрования. Комбинируя эти данные и учитывая, что число фенольных групп может быть определено путем спектрофотометри-ческого титрования, определяют по отдельности числа всех ионизующихся групп в молекуле белка. Число аминогрупп лизина определяется также путем сравнения кривых титрования, исследованных в обычных условиях и в присутствии формальдегида, взаимодействующего с нейтральной аминогруппой и понижающей значение рК этой группы. [29]
Исследуя казеин, Меллон, Корн и Гувер [105] показали, что если добавлять к белку хлористый бензоил в ограниченном количестве в слабощелочном растворе, то происходит ацилиро-вааие большей части аминогрупп. Во многих прежних исследованиях указывалось на то, что в реакцию вступают s - аминогруппы лизина, но высказывалось также предположение об участии IB реакции других групп основного характера. Агатов [29] получил бензоилированный вирус табачной мозаики, сохранивший полную биологическую активность, а Миллер и Стенли [30] приготовили п-хлорбензоилпроизводное этого вируса. При замещении до 70 % аминогрупп и только 11 % ( в сумме) фенольных и индольных групп образующееся п-хлорбензоильное производное полностью сохраняет свою активность в организме одного хозяина - Nicotiana glutinosa - но наполовину теряет инфекционную способность в организме другого - Phaseolus vulga-ris. Ниже приводится основная реакция, которую претерпевает белок при добавлении минимальных количеств хлористого бензоила. [30]
Страницы: 1 2 3