Cтраница 3
В образовании амидных связей в полипептидах обычно принимают участие а-амино - и карбоксильная группы остатка лизина. Примерами такого типа связывания лизина в пептидах могут служить лизин-вазопрессин, а - и р - МСГ, АКТГ, глюкагон и эледоизин. Иногда ( например, в каллидине) лизин является N-концевой аминокислотой. Аминогруппа лизина очень редко принимает участие в образовании пептидных связей. Это говорит о том, что лизин может являться центром разветвления полипептидных цепей в белках. [31]
В образовании амидных связей в полипептидах обычно принимают участие а-амино - и карбоксильная группы остатка лизина. Примерами такого типа связывания лизина в пептидах могут служить лизин-вазопрессин, а - и р - МСГ, АКТГ, глюкагон и эледоизин. Иногда ( например, в каллидине) лизин является N-концевой аминокислотой. Аминогруппа лизина очень редко принимает участие в образовании пептидных связей. Это говорит о том, что лизин может являться центром разветвления полипептидных цепей в белках. [32]
К 1 - й группе относятся шесть А. В аспарагиновой и глутаминовой кислотах р - и у-карбоксильные группы при рН 7 0 заряжены отрицательно. Аминогруппа лизина и гуанидиновая группировка аргинина несут положит, заряд ( протонированы) в нейтральной среде, а имидазольная группировка гистидина - в кислой. В щелочных условиях отрицат. Характерной особенностью остатков цистеина является их способность в составе молекулы белка подвергаться окислению с образованием остатков цистина. В 1986 в ряде белков архебак-терий, истинных бактерий ( эубактерий) и животных была обнаружена а - А. [33]
Для гуанидирования кристаллического сывороточного альбумина человека Хьюз и сотрудники выдерживали 20 % - ный раствор белка в 0 5 М растворе О-метилизомочевины при 0 в течение 3 дней. При рН 10 оба реагента ионизированы только частично и сама О-метилизомоче-вина проявляет буферное действие. При расчете баланса реакции на 1 моль белка получается хорошее соответствие между числом исчезающих аминогрупп ( определенным по методу Ван-Сляйка) и числом молей израсходованного реагента. Исчерпывающая реакция с метилизомочевиной приводит к превращению только 54 - 57 из 68 свободных аминогрупп сывороточного альбумина, однако это количество практически эквивалентно числу лизино-вых остатков. Ранее проведенными исследованиями Гринштейна [ 147а ] л других авторов было показано, что О-метилизомочевина легко вступает в реакцию с & - аминогруппой лизина и пептидов лизина. [34]
Физико-химические и иммунологические исследования дали большое количество данных, свидетельствующих о том, что глобулярные белки имеют жесткую структуру, остающуюся неизменной при высаливании белков, их кристаллизации и растворении. Белки являются единственными соединениями этого рода. Каучук, крахмал и многие синтетические макромолекулы меняют расположение цепей при растворении и в связи с этим теряют ту специфическую структуру, которая присуща им в твердом состоянии. Развернутые цепи молекул этих соединений в растворе могут образовывать бесчисленное количество сочетаний с одинаковыми энергетическими уровнями, в связи с чем они не обнаруживают никакой специфичности. Специфичность белков связана с сохранением ими внутренней структуры, а последняя, в свою очередь, обусловлена наличием перекрестных связей между свернутыми пептидными цепями. В предыдущих разделах было указано на три типа этих связей: 1) дисульфидные мостики, образованные цистином; 2) солевые мостики, образованные карбоксильными группами аспарагиновой и глутаминовой кислот и аминогруппами лизина или гуанидиновыми группами аргинина; 3) водородные связи между пептидными группировками и полярными группами аминокислот. [35]
Реакция с 2 4-динитрофторбензолом ( ДНФБ), введенная Зан-гером [9], представляет собой реакцию алкилирования, которая, как это видно из приведенных выше примеров, приобрела большое значение при исследовании концевых групп и при установлении порядка чередования аминокислотных остатков в белках. Однако этот реагент оказался малополезным при изучении свойств белков и их биологической активности ( 74а, 169, 170, 172, 175) ДНФБ количественно реагирует со свободными аминогруппами белка, образуя динитрофенил - ( ДНФ -) производные последнего. Эту реакцию проводят в бикарбонатном растворе в мягких условиях, при которых не происходит гидролиз пептидных связей. При определении концевых аминокислот ДНФ-производные белка подвергают полному гидролизу сильной кислотой. При этом выделяются стабильные ДНФ-аминокислоты, которые благодаря их желтой окраске можно после хроматографического разделения идентифицировать и количественно определить колориметрическим способом. При определении порядка чередования аминокислотных остатков в белке последний подвергают только частичному гидролизу при помощи кислоты или фермента. Образующиеся при этом пептиды обрабатывают ДНФБ. Реакция с ДНФБ не является специфической реакцией на свободные а-амино-группы. Динитрофторбензол соединяется также с е - аминогруппами лизина с образованием е - ДНФ-лизина, который может быть идентифицирован. [36]