Cтраница 3
Разделение производных аминокислот с помощью ГХ, которое было описано в предыдущих разделах, наталкивается на ряд трудностей, объясняемых несколькими причинами. Как уже упоминалось, раствор природных аминокислот представляет собой сложную смесь соединений различной летучести и полярности. Для этой смеси характерен широкий интервал удерживаемых объемов и необходимы высокие температуры разделения. В некоторых случаях, например для метиловых эфиров ДНФ-аминокислот, ГХ-анализ удается провести только на коротких колонках с малым количеством жидкой фазы. С другой стороны, наиболее летучие простые аминокислоты представляют собой близкие по структуре ( в некоторых случаях изомерные) соединения, и для их разделения необходимы колонки с высокой избирательностью. Положение может еще более осложниться из-за того, что некоторые О-замещен-ные оксиаминокислоты выходят в тех же интервалах удерживаемых объемов и их пики могут накладываться на пики вышеупомянутых аминокислот. Этим проблемам уделяется особое внимание в работе [ 191, где показано, что, несмотря на использование более 80 различных жидких фаз, так и не удалось количественно разделить н-амиловые эфиры следующих ТФА-аминокислот: Ала, Вал, Гли, Иле, Лей, Сер, Тре. В данном случае неудачное разделение происходит главным образом из-за О-ТФА-производных Сер и Тре. Как многократно наблюдали, производные со свободной ОН-груп-пой имеют большие удерживаемые объемы и не мешают разделению. [31]
Все эти свойства чрезвычайно выгодны для ГХ, но недостатками ДНФ-производных являются высокая полярность и относительно низкое давление паров. К настоящему времени достаточно изучена хроматография только ДНФ-производных простых аминокислот. Из-за процессов разложения при необходимых высоких температурах метод оказался непригодным для Сер, Тре, Три и Гис. Есть сообщение [54] о том, что обнаружены метиловые эфиры быс - ДНФ-Лиз и быс - ДНФ-Орн, но данные о соответствующем эфире Apr от-суствуют. Как показано при исследовании пептидов неизвестного строения [40], метод применим для количественного анализа простых аминокислот. [32]
К сожалению, этот довольно изящный метод имеет недостатки, из-за чего область его применения ограничена. Наиболее серьезный недостаток состоит в том, что побочные продукты, которые могут образоваться при неполном восстановлении, невозможно выделить. Когда имеют дело со смесью пептидов неизвестного состава, трудно отличить истинное производное от побочного продукта, так как последний также может детектироваться в газовом хроматографе. Еще одна побочная реакция в результате разрывов пептидных связей при восстановлении может привести к появлению новых соединений ( свободных аминов и альдегидов), которые еще более усложняют картину. Мы вынуждены признать, что этот метод может применяться только для не слишком сложных смесей нескольких простых аминокислот. [33]
Определение пиридина имеет следующие особенности. В начале титрования электропроводность раствора по мере прибавления НСЮ4 резко возрастает. Когда начинается выпадение осадка перхлората пиридина, скорость прироста электропроводности раствора сильно снижается и в дальнейшем медленно возрастает из-за невысокой скорости образования осадка. Так продолжается до момента достижения ТЭ, после которой происходит новое резкое увеличение электропроводности. Медленное образование осадка приводит к тому, что титрование длится более часа. Это препятствует применению метода для эктрессных определений. Так, в работе [118] показано, что в ледяной уксусной кислоте пептиды не титруются, тогда как простые аминокислоты, террамициновые и актиномициновые основания определяются с удовлетворительной точностью. [34]
Эти исследования были продолжены Фасоном и др. [18], которые обнаружили по одной или по две полосы поглощения в интервале 2760 - 2530 см 1 для 10 соединений из 13, исследованных Рендаллом и др. [17], и, кроме этого, еще для 5 исследованных ими соединений. J у всех исследованных ими а-аминокислот, включая многие соединения, у которых имеется разветвление при углеродном атоме в а-положении. Однако, когда в состав молекулы вводятся другие полярные группы, положение становится более сложным. У орни-тина, например, полоса 2128 еж J отсутствует. Она появляется в этом месте спектра у гексагомосерина и постепенно смещается в низкочастотную область при уменьшении длины цепи. Поэтому хотя и ясно, что в этой области спектра должно обнаруживаться характеристическое поглощение, связанное с валентными колебаниями NH, в случае каких-либо соединений более сложных, чем простые аминокислоты, пользоваться этой корреляцией нужно осторожно. [35]