Cтраница 4
Таким образом, рассчитанные кривые зависимости двух типов субъединиц от концентрации НАД имеют различный характер. С ними сравнивают экспериментально полученную кривую зависимости флуоресценции связанного аурамина О от концентрации добавленного НАД. В случае ее совпадения с ходом кривой, описывающей концентрацию субъединиц, одновременно занятых аурамином О и НАД, можно заключить, что конформационные изменения белка под действием НАД, отражающиеся на свойствах аураминсвязывающих областей молекулы, локализованы внутри одной субъединицы. При несовпадении экспериментальной кривой с зависимостью, полученной для этого типа субъединиц, ее сравнивают с поведением рассчитанной кривой для субъединиц, находящихся в комплексе только с НАД. Корреляциу двух кривых в этом случае указывает на чувствительность аураминсвязывающих зон одной субъединицы к связыванию НАД в активном центре другой. Если между экспериментально полученной кривой и суммой обеих рассчитанных соответствие наилучшее, делают заключение о том, что состояние белкового окружения связанного аурамина О чувствительно как к связыванию кофермента в активном центре той же субъединицы, так и к состоянию активного центра субъединицы, свободной от аурамина О. Таким образом, два последних варианта указывают на передачу сигнала между активным центром одной субъединицы молекулы ЛДГ и катионсвязывающим участком другой. [46]
Весь процесс образования волокна может быть также изучен методом флуоресценции. Так, при сухом формовании локальная вязкость прядильного раствора, характеризующая способность к прядению [39, 40], может быть определена флуоресцентным методом, если в системе присутствует аурамин О. Микроскопическое наблюдение распределения флуоресценции у выходных отверстий фильеры дает возможность судить о гидродинамических условиях прядения. Этот метод позволяет также проследить за скоростью высушивания сформованной нити и за образованием пленки. И наконец, увеличение флуоресценции при растяжении является мерой подвижности полимерных цепей. Этот же общий метод может быть, естественно, применен к формованию из расплава и мокрому прядению. При использовании больших прядильных систем желательно помещать несколько кремниевых фотоэлементов вдоль прядильной машины и с помощью вращающегося механического выключателя получать информацию о процессе прядения. Разрыв волокон, содержащих аурамин О, обычно происходит в местах, проявляющих наиболее интенсивную флуоресценцию. [47]