Cтраница 3
![]() |
Зависимость величины Rf чистого вещества ( глицина от количества пробы. [31] |
Впрочем, величина Rf может изменяться в присутствии постороннего вещества незначительно. Так, например, Rf увеличивается для кислых аминокислот в растворителе к-пропанол - вода ( 70 - f - 30), если эти кислоты находятся в смеси с другими аминокислотами. Для смесей ДНФ-аминокислот также установлено значительное влияние на величину Rf соотношения количеств, причем, как это известно из бумажной хроматографии [45], в особенности мешает динитрофенол. [32]
Окись алюминия может быть в различных формах: основной, нейтральной и кислой. Кислую окись алюминия используют для хроматографии веществ кислотного характера, например карбоновых кислот, кислых аминокислот и других. Нейтральную окись алюминия обычно применяют для хроматографии из неводных растворов органических соединений, таких как предельные углеводороды, альдегиды, кетоны, спирты, фенолы, эфиры. [33]
Если смесь аминокислот пропустить через сильноосновный анионит, поглощаются все аминокислоты, кроме аргинина. Десорбция этих аминокислот может производиться разбавленной кислотой; полученный раствор пропускают через смолу амберлит 1R - 4B, поглощающую кислые аминокислоты. [34]
![]() |
Схема разделения аминокислот на три основные группы при помощи ионообменных смол. [35] |
Если смесь аминокислот пропустить через сильноосновный анионит, поглощаются все аминокислоты т кроме аргинина. Десорбция этих аминокислот может производиться разбавленной кислотой; полученный раствор пропускают через смолу амберлит IR - 4B, поглощающую кислые аминокислоты. [36]
Работы Бергмана и его сотрудников показали, что для ферментативного гидролиза пептидов необходимо наличие боковых цепей определенной структуры. Так, например, для протеолити-ческого действия трипсина необходимо наличие в пептидах щелочных боковых цепей, пепсин же проявляет свое действие при наличии боковых цепей, содержащих ароматические или кислые аминокислоты. [37]
Ампициллин ( Амп) и цефалексин ( Цел) - это дипептпды, в том и другом случае ацильный остаток - Д ( - ) а-аминофенилуксусная кислота ( Д - ФГ) и так называемые ядра - моноаминокарбоновые кислые аминокислоты 6 - АПК и 7 - АДЦК. [38]
Количественная нейтрализация казеина показала, что он связывает вдвое больше гидрата окиси натрия, нежели соляной кислоты, и оказалось, что состав этого амфотерного белка вполне соответствует данным его нейтрализации; при гидролизе его образуется вдвое больше молекул кислых аминокислот, нежели основных. [39]
Разделение смеси аминокислот методом ионообменной хроматографии основано на различии в их изоэлектриче-ских точках. Аминокислоты можно условно разделить на три группы; основные, нейтральные и кислые. Наконец, кислые аминокислоты являются моноаминодикарбоновыми кислотами. [40]
Но не у всех белков амфотерность одинакова, у одних преобладают кислотные свойства, у других - основные. Так, на нейтрализацию казеина расходуется едкого натра в два раза больше, чем соляной кислоты. При гидролизе его кислых аминокислот получается вдвое больше, чем основных. [41]
HCN в атмосфере, пробирка, восходнщан хроматография; 7 - фенол, насыщенный водой, 3 % NHg в атмосфере, пробирка, иосходящая хроматография; 8 - д - крезол, насыщенный водой - fкупрон, 0 1 % NHa u атмосфере, пробирка, восходящая хроматография; ft - л-крезол, насыщенный водой купрон, пробирка, восходнщан хроматография; ю - смесь коллпдина и лутпдина, насыщенная подои, цилиндр, восходящая хроматография; 11 - 75 % - ный тетрагидрофуриловый спирт, пробирка, восходящая хроматография. Глутаминовая кислота ( Глу) - пример кислых аминокислот, аргишш ( Apr) - пример основных аминокислот, глпкокол ( Гли) - - пример нейтральных алифатических аминокислот, фенилаланип ( ФА) - пример нейтральных циклических аминокислот. [42]
Для идентификации аминокислот наиболее широко используются их ФТГ-производные. Как показывают данные этой работы, разрешающая способность колонки сильно зависит от рН и ионной силы элюента, скорости потока, а также от температуры предварительной и основной колонок. По этой причине часто трудно установить точное положение пиков, отвечающих ФТГ-производным основных и кислых аминокислот. Даже незначительное изменение рН сильно сказывается на времени удерживания ФТГ-Asp и ФТГ-Glu, а ФТГ-His и ФТГ-Arg могут при этом элюироваться одновременно. С увеличением рН от 3 5 до 6 0 уменьшается время удерживания производных кислых и основных аминокислот, тогда как увеличение концентрации ацетат-ионов при постоянном значении рН приводит к уменьшению времени удерживания только ФТГ-производных основных аминокислот. Установлено также, что оптимальное разрешение пиков, отвечающих ФТГ-производным метионина, вали-на, лизина и изолейцина, достигается при скорости потока 1 3 мл / мин. [43]
Субтилизин прежде всего расщепляет связи по соседству с сернном, глицином и ароматическими аминокислотами. Эластаза менее специфична и преимущественно гидролизует связи нейтральных аминокислот. Основными точками воздействия малоспецифичного папаина являются остатки аргинина, лизина и глицина, кислые аминокислоты не затрагиваются. Термолизин предпочтительно расщепляет полипептидную цепь по аминокислотным остаткам с гидрофобной боковой цепью. [44]
Оно [18] и Нью и Френкель-Конрат [19, 20], развивая изложенный выше метод, предложили принцип частичного гидразинолиза, который дает возможность получить дополнительную информацию о С-концевой последовательности. Кислые ДНФ-производные образуются как из С-концевых пептидных групп, так и из неконцевых пептидных фрагментов, содержащих кислые аминокислоты ( см. схему на стр. [45]