Cтраница 4
В изоэлектрической точке суммарный заряд белков, обладающих амфотер-ными свойствами, равен нулю и белки не перемещаются в электрическом поле. Зная аминокислотный состав белка, можно приближенно определить изоэлектрическую точку ( pi); pi является характерной константой белков. Изоэлектрическая точка большинства белков животных тканей лежит в пределах от 5 5 до 7 0, что свидетельствует о частичном преобладании кислых аминокислот. Однако в природе имеются белки, у которых значения изоэлектрических точек лежат в крайних значениях рН среды. [46]
Максимальная концентрация аминокислот в крови достигается через 30 - 50 мин после приема пищи. Процесс всасывания аминокислот энергозависим и сопряжен, как правило, с функционированием На К - АТФазы. Считают, что существует пять транспортных систем, каждая из которых настроена на перенос близких по строению аминокислот: нейтральных аминокислот с небольшим радикалом; нейтральных аминокислот с объемным радикалом; кислых аминокислот; основных аминокислот и пролина. В настоящее время установлено, что большинство аминокислот переносятся через плазматические мембраны клеток с помощью у-глутаминильного цикла, в котором участвуют 6 ферментов, причем один из них - у-глутаминилтрансфераза - локализован в плазматической мембране. Этот фермент осуществляет перенос у-глутаминильной группы внутриклеточного трипептида глутатиона ( у-глу-цис-гли) на внеклеточную аминокислоту. Образовавшийся комплекс у-глутаминил-аминокислота проникает в цитозоль клетки, где аминокислота освобождается. Глутаминильная группа в виде 5-оксопролина через ряд ферментативных стадий и при участии АТФ соединяется с цис-гли, что ведет к восстановлению молекулы глутатиона. При переносе следующей молекулы аминокислоты через мембрану цикл превращений повторяется. [47]
Системы активного переноса аминокислот обнаружены в клетках различного типа. Известно пять таких систем, они обеспечивают транспорт: ]) нейтральных аминокислот с небольшими молекулами, 2) нейтральных аминокислот с крупными молекулами, 3) основных аминокислот, 4) кислых аминокислот, 5) имиш - кислот. [48]
Быстрое развитие жидкостной хроматографии высокого разрешения ( ЖХВР) при биохимических анализах привело к значительным успехам и в применении к разделению 2-тио - З - фенилгидантои-нов. Значительные расходы на оборудование компенсируются удобством непрерывного и количественного детектирования с помощью поглощения в УФ-области. Полное разделение на одной колонке, однако, весьма затруднительно, так как большинство тиогидантои-нов необходимо делить в условиях ЖХВР на колонке с силикаге-лем в градиенте от смеси гептан-хлороформ ( 1: 1, по объему) к метанолу, тогда как производные кислых аминокислот в этих условиях трудно элюировать. Одним из решений является применение второй колонки, содержащей гидрофобный адсорбент для обращен-но-фазовой ЖХВР. [49]
Колонка была термостатирована при 37 0 2; давление - примерно 70 атм. Указанные значения скорости элюции, температуры, рН и ионной силы должны выдерживаться строго. Так, при увеличении скорости не разделяются ФТГ-производные Phe и Не. При рН 5 1 задерживаются кислые аминокислоты, а при больших рН не разделяются ФТГ-карбоксиметилцистеин ( цистеин, как обычно, во избежание окисления алкилировали) и ФТГ-Gly. При изменении концентрации ацетата аммония сдвигаются пики ФТГ-Arg и ФТГ-His. Разделение ФТГ-АК, показанное на рис. 87, можно считать достаточно хорошим. [50]