N-концевая аминокислота
Cтраница 2
 |
Деградация по Эдману. [16] |
Специфический тиогидантоин служит для идентификации первой N-концевой аминокислоты. Проводя во второй раз всю последовательность реакций, можно определить следующую аминокислоту, так как она стала N-концевой в результате деградации по Эдману. [17]
Таким образом, динитрофенолом метили N-концевую аминокислоту, и поскольку его связь с этой аминокислотой была более прочной, чем связь между аминокислотами в цепи, после разрушения пептида на отдельные фрагменты он мог выделить ту иа них, которая была связана с динитрофенодом, Динитрофенол имеет желтый цвет, поэтому аминокислоту, меченную им; при Хроматографии на бумаге легко определить по желтой1 окраске пятна. [18]
 |
Деградация по Эдману. [19] |
В результате реакции фенилизотиоцианата с N-концевой аминокислотой образуется аддукт ( тиомочеви-на), который циклизуется в уксусной кислоте. При кислотном гидролизе аддукт расщепляется. [20]
При полном гидролизе ДНФ-полипептида образуется ДНФ-производное N-концевой аминокислоты, при частичном же гидролизе получается смесь ДНФ-пептидов, которые можно разделить и гидролизовать, а затем идентифицировать образовавшиеся аминокислоты. Например, Сеыгеру удалось окислить инсулин надмуравьиной кислотой и выделить две фракции, в одной из которых ( фракция В) содержался N-концевой остаток фенил ал а-нина. [21]
Чаще всего полный состав пептида, N-концевую аминокислоту которого определяют, бывает известен, и, следовательно, для идентификации ДНФ-аминокислоты достаточно одномерной хроматографии. [22]
В основном данные об аминокислотном составе и определении N-концевой аминокислоты в трансферрине и кональбумине, по сведениям из ряда лабораторий, находятся между собой в хорошем согласии ( табл. 9.1) и не содержат ничего необычного. Так как было сообщено, что кональбумин и птичий сывороточный трансферрин имеют одинаковую белковую часть [8], можно полагать, что различия в аминокислотном составе между сывороточным трансферрином человека и кональбумином отражают видовое разнообразие. Оба - и трансферрин и кональбумин, - по-видимому, содержат только по одному концевому N-аминокислотному остатку в молекуле. [23]
Кислый раствор после превращения фенилтиокарбамилпептидов, содержащий фенилтиогидантоин соответствующей N-концевой аминокислоты исходного пептида, экстрагируют этилацетатом. ФТГ-аргинин не удается экстрагировать из щелочного раствора; уже при рН 9 наступает разложение. [24]
Вторым продуктом реакции является гидрохлорид пептида, укороченного на N-концевую аминокислоту, так как мягкие условия образования ФТГ не вызывают разрушения пептидных связей. ФТГ, образующиеся из природных аминокислот, представляют собой хорошо кристаллизующиеся вещества с характеристичными температурой плавления, хромато-графической и электрофоретической подвижностями. Вследствие меньшего по сравнению с остатком пептида молекулярного веса ФТГ продукты деградации по Эдману могут быть легко разделены, например, гель-хроматографией. Сравнение перечисленных выше характеристик выделенного ФТГ с данными для набора природных аминокислот позволяет однозначно определить строение N-концевой аминокислоты. Укороченный пептид, отделенный от ФТГ, может быть снова подвергнут деградации; ее результатом будет установление строения второй по порядку следования аминокислоты. Таким образом можно последовательно установить строение каждого аминокислотного остатка от N - до С-концевого. [25]
Вторым продуктом реакции является гидрохлорид пептида, укороченного на N-концевую аминокислоту, так как мягкие условия образования ФТГ не вызывают разрушения пептидных связей. ФТГ, образующиеся из природных аминокислот, представляют собой хорошо кристаллизующиеся вещества с характеристичными температурой плавления, хромато-графической и электрофоретичеекой подвижностями. Вследствие меньшего по сравнению с остатком пептида молекулярного веса ФТГ продукты деградации по Эдману могут быть легко разделены, например, гель-хроматографией. Сравнение перечисленных выше характеристик выделенного ФТГ с данными для набора природных аминокислот позволяет однозначно определить строение N-концевой аминокислоты. Укороченный пептид, отделенный от ФТГ, может быть снова подвергнут деградации; ее результатом будет установление строения второй по порядку следования аминокислоты. Таким образом можно последовательно установить строение каждого аминокислотного остатка от N - до С-концевого. [26]
Соединения табл. 1 перечисляются таким образом, что при постоянной N-концевой аминокислоте ак варьируется аминокислота х с концевой карбоксильной группой, что дает ряды дипеп-тидов ак-х. Сразу же можно заметить, что порядок С-концевых аминокислот х одинаков для каждого ряда. Более того, в каждом ряду сдвиг соединений характеризуется довольно постоянным фактором. Это дает основание распространить систему относительных времен удерживания на другие дипептиды, относительные времена удерживания которых еще не измерялись, при условии, что в качестве стандарта доступно по крайней мере по одному соединению каждого ряда. Вейганд, Кольб и Кирхнер [23], а позднее также и Томида, Токуда, Охаши и Накаджима [24] использовали для подобных расчетов соответствующий график. Эта система, однако, проще объясняется с помощью индексов удерживания и будет рассмотрена позже. В табл. 2 собраны некоторые триметилсилильные эфирные производные метиловых эфиров N-ТФА-дипептидов, разделявшихся с апиезоновой смазкой в качестве жидкой фазы. [27]
Поскольку аланин - уходящая группа, глицин должен оказаться N-концевой аминокислотой. [28]
Обработка продукта реакции кислотой приводит к циклизации и освобождению фенилтиогидантоина N-концевой аминокислоты, природу которого устанавливают хроматографически. Укороченный на одну аминокислоту полипептид подвергают дальнейшему анализу. [29]
Тетрапептид аланилсерилглицилвалин ( ala-ser - gly-val) имеет в качестве N-концевой аминокислоты аланин, а на С-конце - валин. [30]
Страницы: 1 2 3 4