Клеточная линия
Cтраница 2
Фенотипически смешанный вирус получают с помощью котрансфекции клеточной линии, которая синтезирует продукты генов gag и pol, рекомбинантным ретровирусным вектором и вектором, экспрессирующим ген env другого вируса. Изменяя ген env, можно как сузить спектр инфицируемых вирусом клеток до строго определенного типа, так и расширить его. Кроме того, в ген env ретровируса можно встроить нуклеотидную последовательность, кодирующую пептид, который связывается с определенным клеточным рецептором и обеспечивает внедрение рекомбинантного ретровируса в нужные клетки. И наконец, можно добиться специфичности экспрессии терапевтического гена, осуществляя ее под контролем промотора, специфичного для определенных клеток. [16]
Штамм - происходит из первичной культуры или клеточной линии при селекции или клонировании клеток, имеющих специфические свойства или маркеры. [17]
Методы молекулярной биологии также играли важное значение при разработке непрерывных клеточных линий, которые могут быть использованы для анализа токсичности органов-мишеней. Эти клеточные линии образуются путем трансфекции ДНК в первичные клетки. При процедуре трансфекции клетки и ДНК обрабатываются таким образом, что ДНК может захватываться клетками. ДНК можно модифицировать таким образом, что иммортализация генов контролируется при помощи специального стимулятора. Преимущество данного типа сообщества заключается в том, что клетки разделяются только в том случае, когда они получают соответствующий химический стимул для экспрессии гена, вызывающего иммортализацию. Примером такого сообщества является крупный Т - ан-тиген, полученный из Simian Vims 40 ( SV40) ( ген, вызывающий иммортализацию), которому предшествует область стимуляции гена металлотионина, индуцируемого в присутствии металла в культурной среде. Таким образом, после трансфекции гена в клетки клетки могут быть обработаны слабой концентрацией цинка для стимуляции МТ активатора и включения экспрессии Т - антигенового гена. В этих условиях происходит размножение клетки. При удалении цинка из среды клетки прекращают деление и в идеальных условиях возвращаются в состояние, при котором они выражают функции, характерные для конкретных тканей. [18]
 |
Использование моноклональных антител для выявления различных соединений и диагностики инфекционных заболеваний. [19] |
После культивирования полученных клонов среды вновь тестируют, определяя, какая из клеточных линий ( гибридом) продуцирует мо-ноклональные антитела, распознающие антиген-мишень. В том случае, когда получают более одной специфичной гибридомы, проводят дальнейшие исследования, позволяющие определить, направлены ли антитела, вырабатываемые разными клонами, против одной и той же антигенной детерминанты. Каждый клон, продуцирующий моноклопальное антитело, можно поддерживать в культуре практически бесконечно. [20]
Клеточная линия - возникает из первичной культуры при первом удачном субкультивировании; название клеточная линия относится к таким культурам, которые включают линии клеток, изначально присутствующих в первичной культуре. Если известен статус культуры, то используют термины прерывная или непрерывная культура. [21]
Размножаются и вызывают цитопатиче-ские изменения в клетках почек обезьян, эмбриона человека и различных перевиваемых клеточных линиях человеческих клеток. [22]
Этот бакуловирус инфицирует более 30 других видов насекомых, а также хорошо растет в культуре многих клеточных линий. Линии клеток, обычно использующиеся для работы с рекомбинантным AcMNPV, получают из гусениц Spodopterafrugiperda. Промотор полиэдрина в этих клетках чрезвычайно активен, и при их заражении бакуловирусом дикого типа синтезируются большие количества белка. [24]
Таким образом можно идентифицировать пулы ES-клеток, содержащих трансген в нужном сайте, а пересевая клетки из этих пулов - получить клеточные линии с сайт-специфической вставкой. [25]
Моноклональные антитела грызунов, сходные с антителами человека, можно получить, выделив кДНК L - и Н - цепей из клеточной линии гибридомы грызунов и амплифицировав их вариабельные области с помощью ГЩР. В качестве праймеров для амплификации можно использовать олигонуклеотиды, комплементарные высококонсервативным сегментам ДНК, фланкирующим с 5 - и 3 -концов последовательность, кодирующую вариабельную область. Зная нук-леотидные последовательности кДНК вариабельных областей легкой и тяжелой цепей ( VL и VH), легко определить границы CDR, основываясь на том, что соответствующие им последовательности гипервариабельны, в то время как каркасные области относительно консервативны. [27]
В случае активации яиц млекопитающего к развитию в необычных условиях могут образовываться опухоли, называемые тератомами, из которых в свою очередь можно получить злокачественные клеточные линии терато-карцином. Если поместить клетки тератокарциномы внутрь нормальной бластоцисты, они возвращаются в нормальное состояние и могут участвовать в формировании здорового химерного организма. Этот пример превосходно ил-люстрирует общий принцип, согласно которому развитие клеток на ранних стадиях эмбриогенеза направляется и регулируется их окружением. [28]
С применением мембран существенно ускоряется рост в сравнении с агаризованной средой, лучше удается освобождать культуры-от ингибирующего влияния фенольных веществ, выделяющихся в среду, а также предохранять клеточную линию от существенных повреждений при изучении метаболитов, продуцируемых культурами, и др. Таким путем удается уменьшить расход материалов и, как следствие, снизить цены, поскольку культуры могут поддерживаться стечение длительного времени без замены культуральных контейнеров. [29]
Следует также указать, что по ряду признаков имеются существенные отличия в двух категориях культур - первично-эксплан-тированных, клетки которых непосредственно извлечены из организма, и так называемых перевиваемых клеточных линий [6], в которых в результате длительного культивирования in vitro произошла полная адаптация к новым условиям существования. [30]
Страницы: 1 2 3 4