Клеточная линия

Cтраница 4

Общее число удвоений популяции ( уровень удвоения популяции) клеточной линии или штамма за один пассаж in vitro определяют со времени посева в расчете на одно удвоение: Nd In ( N / N0 x 3.33), где N - число клеток в культуральном сосуде на конечный период роста, N0 - число клеток, засеянных в культуральный сосуд, Nd - число популяционных удвоений. [46]

Для эффективного РГ-картирования необходима панель примерно из 100 РГ, полученных из одной монохромосомной гибридной клеточной линии. [47]

Для картирования с использованием радиационных гибридов ( РГ-картирования) не нужно собирать родословные и генотипировать членов банка СЕРН-семей. В основе метода лежит работа с соматическими клетками и скрининг ( с использованием ПЦР-зондов) клеточных линий, содержащих части ( фрагменты) хромосом человека. РГ-картирование целой хромосомы или какой-то ее области начинается с создания гибридной ( человек / грызун) клеточной линии, содержащей одну хромосому человека. Клетки такой монохромосомной гибридной клеточной линии подвергают воздействию летальных доз ионизирующей радиации ( рентгеновских или гамма-лучей), в результате чего разрушаются клеточные мембраны, инактивируются ферменты, происходит фрагментация хромосом. Один рад равен 0 01 Дж на 1 кг ткани или 100 эргам на 1 г ткани. Обычно клетки в культуре погибают при 3000 рад. [48]

Этим гарантируется их высокое качество. Пригодность ингредиентов сред, обеспечивающих рост тканевых культур, оценивают, как минимум, на трех клеточных линиях в 1 - 3 - х пассажах. [49]

Для этого они встроили вирусный геном с предварительно удаленной нуклеотидной последовательностью, ответственной за упаковку, в хромосому клеточной линии, которая в этих условиях производит неинфекционные вирусные частицы. [50]

Часто некоторые клетки перевиваемых первичных клеточных культур претерпевают генетические изменения, в результате которых ускоряется их рост. Культуры клеток, которые при этом приобретают селективные преимущества, оказываются способными к неограниченному росту in vitro и называются устойчивыми клеточными линиями. Одни клеточные линии сохраняют основные биохимические свойства исходных клеток, другие нет. У большинства клеток, способных к неограниченному росту, имеются значительные хромосомные изменения, в частности отмечается увеличение числа одних хромосом и потеря других. В молекулярной биотехнологии устойчивые клеточные линии иногда используют для размножения вирусов и для выявления белков, которые кодируются клонированными последовательностями ДНК. Кроме того, они применяются для крупномасштабного производства вакцин и рекомбинантных белков. [51]

Частичный гидролиз фрагмента ДНК рестрицирующей эндонуклеазой типа И. Глубину гидролиза обычно контролируют изменением времени инкубации или количества фермента. Одни молекулы, представленные на рисунке, расщеплены по всем сайтам для рестрицирующей эндонуклеазы 1 ( RE1 - сайтам, другие только по некоторым. [52]

Чтобы решить эту проблему, суммарную ДНК гидролизуют рест-риктазой и каждый из получившихся фрагментов встраивают в вектор. Теперь необходимо обнаружить специфическую клеточную линию ( клон), которая несет нужную нам последовательность, выделить ее и охарактеризовать. Полная библиотека по определению содержит весь геном данного организма. [53]

Это весьма существенно, особенно если частицы ретровирусного вектора предполагается использовать для геной терапии соматических клеток человека. В качестве меры предосторожности все же проводят регулярное тестирование готовых ретровирусных векторов, с тем чтобы выявить ретровирусы дикого типа. Кроме того, в пакующей клеточной линии нук-леотидные последовательности ретровируса и вектора локализованы в трех разных областях хромосомы, что делает весьма маловероятной возможность последовательных рекомбинаци-онных событий, которые могли бы привести к образованию компетентного по репликации ретровируса. [54]

Его ММ-25 кДа; изолированы TGF 5 - 1и2с71 % гомологией между ними и сходной функциональной активностью. TGFp - ингибитор роста для большинства типов клеток, но может стимулировать образование внеклеточных матриксных белков типа фибронектина и коллагена. TGFa и ( 3 выступают синергистами при трансформации различных клеточных линий. [55]

ДНК каждого члена РГ-панели анализируют с помощью нескольких хромосомоспецифичных ПЦР-зондов, многие из которых узнают полиморфные участки. Однако полиморфизм как таковой не требуется для РГ-картирования. Цель такого картирования - выяснить, присутствует ли данный участок хромосомы в клеточных линиях РГ-панели. Следовательно, для скрининга можно использовать и ПЦР-праймеры, специфичные в отношении уникальных ( однокопий-ных) последовательностей ДНК. [56]

Он связывается рецепторами на поверхности активированных Т - клеток и стимулирует их пролиферацию. Если Т - клетки активируются антигеном в культуре н при этом постоянно присутствует иитерлейкин 2, то они делятся неограниченно. Таким путем можно получить антиген-специфические линии Т - клеток, производные от цитотоксиче-ских Т - клеток, Т - хелперов или Т - супрессороа Некоторые из этих клеточных линий могут быть клонированы, и в результате получаются гомогенные популяции функционирующих антиген-специфических Т - лимфоцитов; это весьма многообещающий подход в области изучения клеточного иммунитета и иммунорегуляцин. [58]

Страницы: 1 2 3 4