Лист - хроматографическая бумага
Cтраница 2
Вырезают из листа хроматографической бумаги № 2 ( для количественного анализа) или № 1 полосу 35 X 11 см так, чтобы длинная ее сторона соответствовала продольному направлению листа. Для качественного анализа вырезают полосу 50x11 см. На каждой вырезанной полосе проводят простым карандашом по линейке линию старта на расстоянии 8 - 10 см от короткого края. [16]
Предварительно на каждый лист хроматографической бумаги наносят калиброванной специальной пипеткой с загнутым кончиком по 3 - 5 капель исследуемого раствора лекарственного вещества. Капли должны быть расположены одна от другой на расстоянии 2 - 3 см. Ближе к краям бумаги наносят капли стандартных растворов, а ближе к середине - капли исследуемого раствора. При этом нужно проследить, чтобы места нанесения капель находились за пределами края рамки, на свободно свешивающейся части бумаги вверху. Капиллярная пипетка представляет собой стеклянную трубку внутренним диаметром 0 4 см ( рис. НО) с расширением длиной 1 5 см, диаметром 1 см. Пипетка с этой стороны заканчивается капилляром длиной 1 5 еж с отогнутым кончиком длиной 0 9 см. Внутри пипетки проходит капилляр длиной 2 5 см, доходящий до середины расширения пипетки. Для наполнения пипетки исследуемым раствором ее погружают капиллярным кончиком в часовое стекло с исследуемым раствором. Капиллярная трубка наполняется этим раствором до противоположного конца вследствие действия капиллярных сил. Капилляр пипетки должен быть предварительно откалиброван на определенный объем. Опорожнение капилляра на поверхность хроматографической бумаги производят легким прижиманием его кончика к намеченному месту на хроматографической бумаге. [17]
 |
Стеклянная кювета для растворителя. [18] |
Предварительно на каждый лист хроматографической бумаги наносят специальной калиброванной пипеткой с загнутым кончиком по 3 - 5 капель исследуемого раствора лекарственного вещества. [19]
Хотя при производстве листов хроматографической бумаги изготовители проявляют особую тщательность, все же для таких сложных структур, как бумага, будут встречаться различия между отдельными листами. Эти различия резче выражены в ТСХ, где большинство исследователей для приготовления пластинок пользуются ручным распределением сорбента по поверхности. Как уже сообщалось, результаты, полученные при развитии хроматограммы, в условиях, когда на бумагу наносят одинаковые количества вещества, могут немного различаться. Как бы то ни было, при количественном анализе всегда возникает следующая проблема: можно ли результаты исследований со стандартными растворами достаточно надежно распространить на результаты, полученные с неизвестным и совершенно отличным количеством анализируемой пробы. Возникает еще и другой вопрос: является ли постоянным для одного листа хроматографической бумаги наклон линии регрессии, связывающей количество вещества, найденного в конечной зоне, с количеством вещества, нанесенным в точку на линии старта. И если это условие выполняется, то сохраняется ли постоянным наклон линии регрессии при развитии хроматограмм на других листах бумаги в одинаковых условиях хроматографического опыта. Авторы работ [3, 4, 7] уже показали, что наклон линии регрессии не всегда постоянен, но, поскольку в этих работах источники ошибок обусловлены процессом нанесения начальных пятен, было решено изучить эту проблему заново, используя устройство, предназначенное для точного измерения начальных объемов. [20]
Для определения спиртов на лист хроматографической бумаги в разны § точки наносят по 0 05 мл раствора свидетелей. Затем свидетели хроматогра1 фируют в тех же условиях, что и пробы. На проявленных хроматограммах обнаруживаются пятна, разные по величине и интенсивности окраски и соответст. [21]
Для определения кислоты на лист хроматографической бумаги в разные точки наносят по 0 1 мл раствора свидетелей, которые, по аналогии с пробами, подвергают анализу. [22]
Для определения спиртов на лист хроматографической бумаги в разные точки наносят по 0 05 мл стандартных растворов и подвергают хроматографическому разделению в тех же условиях, что и пробы. [23]
При заготовке хроматограмм для нисходящего хроматографирования лист хроматографической бумаги с известным расположением волокон размечают простым карандашом на полоски шириной 3 см и длиной 25 - 30 см и проводят линию старта 5 на расстоянии 10 см от предполагаемого верхнего края полос. Ширина язычка 7 полоски должна быть обязательно на 2 - 3 мм больше, чем горлышко колбы, в которую он будет вставлен, поэтому их вырезают при постановке полос на хроматографирова-ние. [24]
В каждую кювету можно погрузить два листа хроматографической бумаги, перекинув их в противоположные стороны через края рамок, так чтобы они свешивались внутри камеры параллельно друг другу. Для укрепления листов бумаги внутри кюветы, наполненной растворителем, конец каждого листа бумаги перед погружением в кювету осторожно обертывают вокруг стеклянной пластинки ( предметное стекло) и погружают вместе с ней в кювету, наполненную растворителем. [25]
 |
Стеклянная кювета для растворителя. [26] |
В каждую кювету можно погрузить два листа хроматографической бумаги, перекинув их в противоположные стороны через края рамок, так, чтобы они свешивались внутри камеры параллельно друг другу. Для укрепления бумаги внутри кюветы, наполненной растворителем, конец каждого листа перед погружением в кювету осторожно обертывают вокруг стеклянной пластинки ( предметное стекло) и погружают вместе с ней в кювету, наполненную растворителем. [27]
По этому методу смесь пептидов наносится в центре листа хроматографической бумаги, проводится электрофорез в буфере с рН 3 6 или 6 5, полученная полоса обрабатывается парами надмуравьиной кислоты для перевода остатков полуцистина в цистеиновую кислоту, и затем повторно проводится электрофорез в тех же условиях, но в перпендикулярном направлении. При проявлении полученной карты нингидриновым реактивом пептиды, содержащие цистеиновую кислоту, обнаруживаются за пределами диагонали. [28]
Для количественного анализа проводят нисходящее многократное Хроматографирование на листе хроматографической бумаги. Одновременно хроматографируют испытуемый раствор и растворы свидетелей. Микропипеткой ( см. рис. 27) на линию старта на расстоянии 3 см друг от друга наносят 0 01 мл испытуемого раствора, затем четыре раствора свидетелей по 0 002 - 0 005 мл и снова исследуемый раствор. Пятна нанесенных растворов просушивают на воздухе, лист бумаги помещают в хро-матографическую камеру, верхний конец листа погружают в растворитель I, налитый в лодочку, камеру закрывают и ждут когда растворитель дойдет до нижнего конца листа. Затем хроматограмму вынимают, просушивают в вытяжном шкафу и снова помещают в хроматографическую камеру. Хроматографирование растворителем I проводят 3 раза. Потом в лодочку наливают растворитель II, хроматограмму просушивают до полного удаления запаха растворителя I, повертывают ее на 90, устанавливают в камеру и 2 раза пропускают через нее растворитель II. Хроматограмму вынимают из камеры, хорошо высушивают на воздухе до полного удаления запаха растворителя, опрыскивают ее раствором нингидрина из пульверизатора, высушивают и на сутки кладут между двумя листами фильтровальной бумаги в темное место. [29]
Чаще применяют нисходящую бумажную хроматографию ( рис. 65), при которой лист хроматографической бумаги свисает в сосуде из укрепленной в верху его специальной стеклянной лодочки со смесью растворителей. Ток этой смеси перемещает разделяемые вещества, нанесенные у верхнего края бумаги, на разное расстояние. Отношение скорости движения растворителя к скорости движения какого-либо вещества называется коэффициентом распределения ( Rf) и в стандартных условиях является величиной постоянной. [30]
Страницы: 1 2 3 4