Лист - хроматографическая бумага
Cтраница 3
 |
Установка для нисходящей бумажной хроматографии.| Схема хромато-граммы. [31] |
Часто применяют нисходящую бумажную хроматографию ( рис. 66), при которой лист хроматографической бумаги свисает из укрепленной в верху сосуда специальной лодочки со смесью растворителей. Ток этой смеси перемещает разделяемые вещества, нанесенные у верхнего края бумаги, на разное расстояние. [32]
Верхний слой жидкости помещают в лодочку, которая расположена в хроматографической камере. На лист хроматографической бумаги на расстоянии 7 см от нижнего края намечают линию старта, на которой фиксируют точки нанесения пробы, на расстоянии 3 - 3 5 см друг от друга. [33]
Для качественных определений рекомендуется проводить восходящую хроматографию. Из листа хроматографической бумаги вырезают полосу, соответствующую примерно диаметру хроматографической камеры. На расстоянии 3 см от конца полосы проводят карандашом линию. [34]
 |
Подготовка хроматогра-фической бумаги для отделения основной массы железа ( а и для разделения Ni2, Со2 и Си2 ( б. [35] |
Готовят два листа хроматографической бумаги размером 23x13 см. Бумагу для первой стадии - отделения основной массы железа - подготавливают так, как указано на рис. 24.3, а: с двух сторон на расстоянии 1 см от боковых краев бумаги вырезают щели 0 5x11 см, а на расстоянии 1 5 см от нижнего края бумаги намечают карандашом стартовую линию. Так же намечают стартовую линию на расстоянии 1 5см от нижнего края бумаги. [36]
На ту же хрома-тограмму наносят растворы нуклеотидов-свидетелей по 0 05 - 0 1 мкмоль каждого Интервал между точками на линии старта должен быть не менее 4 - 5 см. Растворы наносят небольшими порциями и подсушивают в токе холодного воздуха. При восходящей хроматографии ( рис 17) лист хроматографической бумаги сшивают, следя, чтобы края не соприкасались, помещают в камеру и укрепляют в вертикальном положении. [37]
При работе с сефадексами применяют как нисходящую, так и восходящую хроматографию. Для обнаружения результатов хроматографии разделяемые вещества переносят на лист хроматографической бумаги путем контакта бумаги с поверхностью геля в течение обычно 1 мин. Затем бумагу промывают водой, подкисленной уксусной кислотой. [38]
Прежде всего пленку извлекают из раствора с помощью листа хроматографической бумаги. [39]
При выделении и очистке бумажная хроматография может использоваться не только как аналитический метод, но и как препаративный. В этом случае хроматографирование проводят или в пачке листов хроматографической бумаги [305], или на одном листе бумаги обычным методом. Препаративная хроматография на бумаге имеет некоторые преимущества перед другими методами: легкость подбора условий для разделения, очень простой переход от аналитических опытов к препаративным, возможность работать с минимальными количествами препаратов, методическая простота. Хотя теми же достоинствами обладает и хроматография в тонком слое адсорбента, все же бумажная хроматография удобнее при работе с антибиотиками, так как при помощи биоавтографического метода антибиотики проще выявлять на бумаге, чем на тонкослойной пластинке. [40]
Отсеки для электродов наполняют буферным раствором до одинакового уровня ( во избежание перетекания буфера), примерно по 800 мл в каждый отсек. Во внутренние части электродных отсеков погружают электроды. На листе хроматографической бумаги ( 18X45 см) ( при использовании тонких сортов бумаги образцы лучше наносить на отдельные полоски шириной 4 - 5 см) на расстоянии 15 см ют одного из его узких сторон простым мягким карандашом ( графит препятствует растеканию жидкости) очерчивают места для нанесения проб. Они представляют собой прямоугольники ( 2X0 3 см), большие стороны которых располагают перпендикулярно длине бумажной полосы. [41]
Лодочка должна вмещать объем подвижной фазы, достаточный для проведения однократного хроматографирования. Длина лодочки должна превышать ширину листа хромато-графической бумаги. Камера должна быть снабжена устройствами для закрепления листа хроматографической бумаги в рабочем положении и для ввода в лодочку подвижной фазы. [42]
Ниже описывается метод разделения Ni, Co и Си и отделение их от сопутствующих компонентов с помощью бумажной хроматографии. В связи с этим хроматографироиание проводят в две стадии. На первой стадии основную массу железа отделяют на большом листе хроматографической бумаги. На второй выполняют обычное разделение и отделение остатков железа на хро-матогргмме стандартного размера с последующим визуальным сравнением зон элементов. При этом используют плотные сорта хроматографической бумаги марки ЗМ и ЗММ. [43]
Особенно ощутимы эти различия при ТСХ, когда большинство исследователей для приготовления пластин используют ручное распределение сорбента по поверхности. Мы не будем детально рассматривать работы, посвященные этому вопросу, отметим только, что некоторыми авторами указывалось, что различие в хроматографическом поведении может наблюдаться и тогда, когда листы хроматографической бумаги взяты из одной и той же пачки. Может быть, влияние различий между листами на результаты количественной хроматографии несколько преувеличено в ряде работ, но до тех пор, пока не будет доказано обратное, с этим источником ошибок следует все же считаться. [44]
Хотя при производстве листов хроматографической бумаги изготовители проявляют особую тщательность, все же для таких сложных структур, как бумага, будут встречаться различия между отдельными листами. Эти различия резче выражены в ТСХ, где большинство исследователей для приготовления пластинок пользуются ручным распределением сорбента по поверхности. Как уже сообщалось, результаты, полученные при развитии хроматограммы, в условиях, когда на бумагу наносят одинаковые количества вещества, могут немного различаться. Как бы то ни было, при количественном анализе всегда возникает следующая проблема: можно ли результаты исследований со стандартными растворами достаточно надежно распространить на результаты, полученные с неизвестным и совершенно отличным количеством анализируемой пробы. Возникает еще и другой вопрос: является ли постоянным для одного листа хроматографической бумаги наклон линии регрессии, связывающей количество вещества, найденного в конечной зоне, с количеством вещества, нанесенным в точку на линии старта. И если это условие выполняется, то сохраняется ли постоянным наклон линии регрессии при развитии хроматограмм на других листах бумаги в одинаковых условиях хроматографического опыта. Авторы работ [3, 4, 7] уже показали, что наклон линии регрессии не всегда постоянен, но, поскольку в этих работах источники ошибок обусловлены процессом нанесения начальных пятен, было решено изучить эту проблему заново, используя устройство, предназначенное для точного измерения начальных объемов. [45]
Страницы: 1 2 3 4