Cтраница 3
Нек-рые аналоги и производные В. К антивитаминам относятся также в-ва, связывающие или разрушающие В. I и II, инактивирующие тиамин; белок яйца авидин, связывающий биотин, и др. Нек-рые антивитамины обладают антимикробным или канцеростатич. Так, сульфаниламидные препараты-антагонисты и-аминобензойной к-ты, аминоптерин и метотрексат ( противоопухолевые ср-ва) - фолиевой к-ты. [31]
Моноканальные антитела получают простым и весьма остроумным способом, обеспечивающим использование исключительно гибридных клеток. Мышей иммунизируют тем антигеном, получение антител к которому является конечной целью работы. Выделенные В-лимфоциты в присутствии полиэтиленгликоля ассоциируют с клетками миеломы, в результате чего происходит их слияние. Отбору гибридом способствует использование селективной среды, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Миеломные клетки на этой среде погибают из-за отсутствия в них ГГФРТ. Нормальные клетки имеют этот фермент, но также погибают, так как они не способны размножаться в культуре. В результате выживают только гибридные клетки. [32]
Клетки лимфоузла ( чаще всего селезенки), иммунизированного определенным антигеном животного, сливаются в присутствии поли эти лент л и коля с миеломными клетками. Такая гибридизация приводит к образованию клеток, унаследовавших от одной из родительских клеток ( плазматической клетки) способность секретиро-вать антитела, а от другой ( миеломной) - способность к бесконечному делению. Ключевым моментом является отбор гибридных клеток, отделение от родительских клеток. Если блокировать и основной путь биосинтеза пуринов и пиримидиновс помощью аминоптерина, то такие мутанты оказываются нежизнеспособными и погибают. Гибридные же клетки, имеющие от второй родительской клетки гены ГФТ и ТК, способны к размножению в присутствии аминоптерина; таким образом, культивируя клетки после слияния на селективной среде ( содержащей аминоптерин), удается добиться избирательного роста популяции гибридных клеток. Рассеивая гибридные клетки по лункам иммунологического планшета, добиваются того, чтобы в лунке оказался лишь один клеточный клон, отбираются клоны, секрети-рующие антитела нужной специфичности ( для чего проверяется наличие соответствующих антител в культуральной среде), а затем наращиваются гибридные клетки в больших количествах in vitro или in vivo в виде асцитов у животных. Такая технология позволяет нарабатывать значительные количества так называемых монокло-нальных ( продуктов одного клона) гомогенных антител. [33]
До 1958 г. имелось мало работ по химической стерилизации насекомых. Робсон [2] установили, что иприт и его производные могут вызывать мутации у зародышей; Хэддоу и др. [8] сообщили о цито-токсическом действии большой серии арил-2 - галоидалкиламинов; Берд [5] доказал, что алкилирующие соединения обладают стерилизующим действием. Голдсмит и Фрэнк [7] выяснили, что антагонист фолиевой кислоты - аминоптерин - вызывает бесплодие самок. Митлин и другие [17] сообщили данные о влиянии митоти-ческих ядов на откладку яиц комнатной мухой, а Ла Брек с сотрудниками [11, 12] сообщили об использовании химических веществ, которые влияли на метаболизм или вызывали стерильность у комнатных мух. [34]
Клетки лимфоузла ( чаще всего селезенки), иммунизированного определенным антигеном животного, сливаются в присутствии поли эти лент л и коля с миеломными клетками. Такая гибридизация приводит к образованию клеток, унаследовавших от одной из родительских клеток ( плазматической клетки) способность секретиро-вать антитела, а от другой ( миеломной) - способность к бесконечному делению. Ключевым моментом является отбор гибридных клеток, отделение от родительских клеток. Если блокировать и основной путь биосинтеза пуринов и пиримидиновс помощью аминоптерина, то такие мутанты оказываются нежизнеспособными и погибают. Гибридные же клетки, имеющие от второй родительской клетки гены ГФТ и ТК, способны к размножению в присутствии аминоптерина; таким образом, культивируя клетки после слияния на селективной среде ( содержащей аминоптерин), удается добиться избирательного роста популяции гибридных клеток. Рассеивая гибридные клетки по лункам иммунологического планшета, добиваются того, чтобы в лунке оказался лишь один клеточный клон, отбираются клоны, секрети-рующие антитела нужной специфичности ( для чего проверяется наличие соответствующих антител в культуральной среде), а затем наращиваются гибридные клетки в больших количествах in vitro или in vivo в виде асцитов у животных. Такая технология позволяет нарабатывать значительные количества так называемых монокло-нальных ( продуктов одного клона) гомогенных антител. [35]
Обработка полиэтиленгликолем облегчает слияние клеток, тем не менее слияние происходит редко и является в достаточной степени случайным событием. В смеси присутствуют клетки миеломы, селезенки, а также слившиеся клетки миеломы-селезенки, миеломы-миело-мы, селезенки-селезенки. Однако в среде ГАТ растут только гибридные клетки миеломы-селезенки, все остальные типы клеток не могут в ней пролиферировать. Клетки селезенки и слившиеся клетки селезенки-селезенки вообще не растут в культуре, а миеломные клетки HGPRT и слившиеся клетки миеломы-миеломы не могут использовать гипоксантин в качестве предшественника в процессе биосинтеза пуриновых оснований гуанина и аденина, без которых невозможен синтез нуклеиновых кислот. Но у них есть другой естественный путь синтеза пуринов - при участии дигидрофолат-редуктазы, поэтому в состав среды и входит аминоптерин, ингибирующий активность этого фермента. [36]
Клетки лимфоузла ( чаще всего селезенки), иммунизированного определенным антигеном животного, сливаются в присутствии поли эти лент л и коля с миеломными клетками. Такая гибридизация приводит к образованию клеток, унаследовавших от одной из родительских клеток ( плазматической клетки) способность секретиро-вать антитела, а от другой ( миеломной) - способность к бесконечному делению. Ключевым моментом является отбор гибридных клеток, отделение от родительских клеток. Если блокировать и основной путь биосинтеза пуринов и пиримидиновс помощью аминоптерина, то такие мутанты оказываются нежизнеспособными и погибают. Гибридные же клетки, имеющие от второй родительской клетки гены ГФТ и ТК, способны к размножению в присутствии аминоптерина; таким образом, культивируя клетки после слияния на селективной среде ( содержащей аминоптерин), удается добиться избирательного роста популяции гибридных клеток. Рассеивая гибридные клетки по лункам иммунологического планшета, добиваются того, чтобы в лунке оказался лишь один клеточный клон, отбираются клоны, секрети-рующие антитела нужной специфичности ( для чего проверяется наличие соответствующих антител в культуральной среде), а затем наращиваются гибридные клетки в больших количествах in vitro или in vivo в виде асцитов у животных. Такая технология позволяет нарабатывать значительные количества так называемых монокло-нальных ( продуктов одного клона) гомогенных антител. [37]
В схеме на рисунке 7 представлено большинство известных взаимопревращений коферментов фолиевой кислоты, но не следует думать, что все эти превращения происходят во всех клетках. Однако сюда включены участки, для которых доказано цитотоксическое действие аминоптерина. Фермент тимидилат-син-тетаза превращает дезоксиуридилат в тимидилат для последующего использования в синтезе ДНК. Коферментная форма фолиевой кислоты 1Ч5 - 1о - метилен ТГФ превращается в ДГФ в процессе метилирования и окисления. Затем редуктаза ДГФ катализирует обратное превращение ДГФ в ТГФ и другие ферменты завершают рециркуляцию. Возбуждение ДГФ-редуктазы, по-видимому, происходит в результате ее связывания аминоптерином, так как клетка обычно отзывается усиленным синтезом фермента. Во многих случаях было доказано, что устойчивость к этому фолатному аналогу сопровождается соответствующим увеличением количества ДГФ-редуктазы. [38]
Учитывая важное биохимическое значение нуклеиновых кислот, следует обратить внимание на возможность вмешательства в их синтез на основе изучения действия антагонистов незаменимых метаболитов. Это кажется на первый взгляд неблагодарной задачей, так как организм может синтезировать свои собственные нуклеиновые кислоты, не требуя извне никаких органических составных частей. Кроме того, исследования с мечеными атомами показали, что пуриновое основание может быть создано in vivo из глицина, двуокиси углерода, аммиака и соединений, содержащих один углеродный атом, таких, как муравьиная кислота, тогда как гуанин, урацил, тимин и цитозин не используются для синтеза нуклеиновой кислоты, даже если они доступны. Однако при помощи меченых атомов показано, что поступающий извне в организм аденин способен превращаться в гуанин. Так как при превращениях аденина и гуанина затрагиваются положения 2 и 6 пуринового ядра, введение в эти положения иных заместителей представляется заманчивым для синтеза антиметаболитов. Аминопро-изводное аденина, 2 6-диаминопурин оказался активным метаболитом ь некоторых системах, широко участвующим в образовании пуринов нормальных нуклеиновых кислот и не препятствующим синтезу нуклеиновых кислот. С другой стороны, 6-меркаптопурин ( XXV) превращается в нуклеиновые кислоты. Он также подавляет рост некоторых экспериментальных опухолей у грызунов и может вызвать обратное развитие перевивных опухолей. Кроме того, при перевивке саркомы Крокера от леченого животного опухоль не развивается, как это обычно происходит, и в этом случае раскрывается новый тип биологической активности. У человека предварительные наблюдения были менее обнадеживающими, однако позволяли предполагать, что это средство может найти применение для лечения лейкемии, подобно тому как это происходит в случае аминопте-рина ( XXIII; NH2 вместо ОН), антагониста фолиевой кислоты. Действие аминоптерина, возможно, проявляется в цепи биологических реакций, где-то между образованием амида аминоимидазолкарбоновой кислоты и гипоксантина, так как гипоксантин может снять действие аминоптерина, в то время как 6-меркаптопурин может конкурировать с гипоксантином, который играет роль источника пуринов лейкемических клеток. [39]
Учитывая важное биохимическое значение нуклеиновых кислот, следует обратить внимание на возможность вмешательства в их синтез на основе изучения действия антагонистов незаменимых метаболитов. Это кажется на первый взгляд неблагодарной задачей, так как организм может синтезировать свои собственные нуклеиновые кислоты, не требуя извне никаких органических составных частей. Кроме того, исследования с мечеными атомами показали, что пуриновое основание может быть создано in vivo из глицина, двуокиси углерода, аммиака и соединений, содержащих один углеродный атом, таких, как муравьиная кислота, тогда как гуанин, урацил, тимин и цитозин не используются для синтеза нуклеиновой кислоты, даже если они доступны. Однако при помощи меченых атомов показано, что поступающий извне в организм аденин способен превращаться в гуанин. Так как при превращениях аденина и гуанина затрагиваются положения 2 и 6 пуринового ядра, введение в эти положения иных заместителей представляется заманчивым для синтеза антиметаболитов. Аминопро-изводное аденина, 2 6-диаминопурин оказался активным метаболитом ь некоторых системах, широко участвующим в образовании пуринов нормальных нуклеиновых кислот и не препятствующим синтезу нуклеиновых кислот. С другой стороны, 6-меркаптопурин ( XXV) превращается в нуклеиновые кислоты. Он также подавляет рост некоторых экспериментальных опухолей у грызунов и может вызвать обратное развитие перевивных опухолей. Кроме того, при перевивке саркомы Крокера от леченого животного опухоль не развивается, как это обычно происходит, и в этом случае раскрывается новый тип биологической активности. У человека предварительные наблюдения были менее обнадеживающими, однако позволяли предполагать, что это средство может найти применение для лечения лейкемии, подобно тому как это происходит в случае аминопте-рина ( XXIII; NH2 вместо ОН), антагониста фолиевой кислоты. Действие аминоптерина, возможно, проявляется в цепи биологических реакций, где-то между образованием амида аминоимидазолкарбоновой кислоты и гипоксантина, так как гипоксантин может снять действие аминоптерина, в то время как 6-меркаптопурин может конкурировать с гипоксантином, который играет роль источника пуринов лейкемических клеток. [40]